晚期糖基化終產(chǎn)物誘導人脂肪來源干細胞功能紊亂的機制研究.pdf

1、目的：觀察糖基化人血清白蛋白(Advanced glycated human serum albumin，AGE-HSA)刺激對脂肪來源干細胞(Adipose tissue-derived stem cells，ADSCs)氧化應激、增殖、遷移以及分泌細胞因子的影響，同時對糖基化終產(chǎn)物受體(receptorfor Receptor for Advanced Glycation Endproducts，RAGE)-絲裂原活化蛋白激酶(Mi

2、togen-Activated Protein Kinase，MAPK)-核因子-kB(nuclear factor-kB，NF-kB)通路以及節(jié)律基因參與相應功能紊亂的分子作用機制進行研究。 方法：取美容患者皮下脂肪組織，經(jīng)體外酶消離心分離細胞，通過流式細胞和誘導定向分化后免疫組化染色鑒定為人脂肪來源干細胞。給予不同濃度的AGE-HSA刺激，采用Western-blot觀察RAGE、MAPK及NF-kB通路的蛋白表達變化情況。

3、給予ERK和p38抑制劑阻斷相關信號通路，采用熒光定量逆轉錄多聚酶鏈反應檢測RAGE和節(jié)律基因Rev-erbα、Bmal1和Per2在上述處理后不同時間點的mRNA表達情況；oxyblot和熒光顯微鏡觀察細胞內氧化應激的變化；流式細胞儀和CCK8試劑盒檢測對細胞增殖的影響；transwell小室和刮痕實驗檢測對細胞遷移功能的影響；ELISA檢測細胞因子分泌的變化。采用siRNA轉染ADSCs抑制節(jié)律基因關鍵分子Rev-erbα的表達，研

4、究Rev-erbα在AGE-HSA誘導的病理過程中的作用。 結果：AGE-HSA刺激可顯著抑制ADSCs遷移，但可促進細胞增殖和分泌細胞因子，同時伴有胞內氧化應激反應程度升高和RAGE-MAPK-NF-kB信號通路激活，而ERK和p38抑制劑以及瑞舒伐他汀可不同程度地抑制AGE-HSA的病理作用；AGE-HSA的病理作用伴有節(jié)律基因Rev-erbα、Bmal1和Per2的表達異常，而經(jīng)siRNA轉染抑制細胞Rev-erbα的表達