曼氏裂頭蚴感染診斷的病原鑒定方法研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)觀察和分析曼氏裂頭蚴的解剖組織學和組織病理學用以補充對該病原診斷基礎的不足;探索檢測切片中曼氏裂頭蚴抗原和基因的方法用以解決病理切片中不能確定蟲種的鑒定技術問題。
　　方法：收集來自青蛙和病人的曼氏裂頭蚴標本42個、來自動物的其他蠕蟲標本13個和人體組織標本2個。用倒置顯微鏡比較觀察裂頭蚴各部位的解剖結(jié)構(gòu)組織學特征;福爾馬林固定和石蠟包埋的曼氏裂頭蚴切片標本，對HE染色的蟲體不同部位組織學進行比較觀察;制備曼氏裂頭蚴免疫

2、血清，用間接酶免疫組化法比較檢測不同蟲種切片組織中抗原;設計作曼氏裂頭蚴mtDNACOX1基因部分片斷檢測的引物4對，用商品化試劑分別提取數(shù)種蠕蟲基因組DNA作PCR，取擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳觀察目的條帶，并測序，用blast軟件分析其與已知基因序列的符合率。
　　結(jié)果：曼氏裂頭蚴顯微解剖組織學特征為:頭部吸槽內(nèi)具囊腔;體壁具凹凸橫皺褶;體內(nèi)實質(zhì)呈網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)，富含石灰小體，在體中后部可見排泄小管;從蟲體劃破處可見有大量的呈圓形或橢圓形、

3、無細胞結(jié)構(gòu)的強折光盤狀體溢出，即石灰小體，其個體明顯比體細胞大。曼氏裂頭蚴組織病理學特征為:可因切取部位不同而有差異;頭部形態(tài)最不規(guī)則，其橫切面可見囊腔和成石灰小體;體部和尾部斷面較大;體部的不同切面在組織結(jié)構(gòu)上有差異;除頭部外，蟲體各斷面的共同特征為體壁具凹凸不等的橫皺褶，皮層較厚呈嗜伊紅深染，有的皮層外可見長短不一微毛，體內(nèi)為網(wǎng)狀疏松的實質(zhì)組織，無體腔和消化器官結(jié)構(gòu)，可見分散的肌纖維和圓形，橢圓形或不規(guī)則形石灰小體，亦可見排泄管腔;

4、在病理切片9例中有5例在蟲體組織內(nèi)未見典型的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)（呈鈣化變性），石灰小體和肌纖維束結(jié)構(gòu)不典型。用酶免疫組化法最佳條件，對已知并殖吸蟲、豬囊尾蚴和曼氏裂頭蚴的組織切片檢測均未出現(xiàn)假陰性和假陽性，對12例臨床來源的病理切片中裂頭蚴檢測均呈陽性反應。在基因擴增用的4對引物中，有兩對（F650/ R800和F965/R1120）可檢出曼氏裂頭蚴特異性目的條帶。
　　結(jié)論：本研究描述的曼氏裂頭蚴顯微解剖組織學特征與其觀察方法為病理學對石