基于Tie2的抗腫瘤及新生血管靶向藥物輸送系統(tǒng)研究.pdf

1、腫瘤是一類嚴(yán)重威脅人類生命的惡性疾病，其原因在于人體自身細(xì)胞因?yàn)槭艿礁鞣N內(nèi)在與外界因素的影響，失去正常的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)而造成增殖失控。常規(guī)的治療手段包括手術(shù)切除，放射治療，化學(xué)治療，介入治療，生物治療等等。但是由于常規(guī)的治療手段缺乏特異性，在殺傷腫瘤組織的同時(shí)也作用于正常組織細(xì)胞，造成極大的毒副作用，因此腫瘤特異的靶向藥物輸送尤顯重要。
　　由長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體系統(tǒng)載化療藥物被研究多年，由于其能夠通過(guò)EPR效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤組織，減少毒副作用，

2、同時(shí)能夠在循環(huán)系統(tǒng)中保護(hù)藥物不被降解，延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，因而得到人們的重視。在此基礎(chǔ)上，如果能夠通過(guò)腫瘤上特異性標(biāo)志物的識(shí)別，實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體的腫瘤主動(dòng)靶向，將能夠進(jìn)一步的提高化療藥物的療效。
　　Tie2蛋白是一種受體酪氨酸激酶，其在腫瘤誘導(dǎo)的血管新生過(guò)程中起著重要的作用。Tie2蛋白在腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)水平會(huì)大大提高，同時(shí)Tie2還被部分腫瘤細(xì)胞所表達(dá)。因此，我們以Tie2為靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)腫瘤靶向的脂質(zhì)體藥物輸送系統(tǒng)。
　

3、　靶向藥物輸送系統(tǒng)的關(guān)鍵在于腫瘤特異性標(biāo)記物的靶向配體的篩選，由于小分子多肽具有多樣性高，免疫原性低，制備簡(jiǎn)單，成本低廉，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等多種優(yōu)點(diǎn)，我們選擇了采用噬菌體固相篩選技術(shù)，Autodock對(duì)接評(píng)估計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)技術(shù)以及天然配體Angiopoietin-2受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)分析等多種手段，篩選出能夠與Tie2蛋白特異性結(jié)合的候選多肽配體PH1及An1，并利用表面等離子共振技術(shù)，驗(yàn)證了其與Tie2蛋白的結(jié)合能力，并計(jì)算親和常數(shù)。

4、r>　　為了驗(yàn)證多肽引導(dǎo)脂質(zhì)體藥物輸送系統(tǒng)靶向分布的潛力，我們通過(guò)連接劑SPDP，利用巰基與馬來(lái)酰亞胺基的特異性反應(yīng)，將多肽偶聯(lián)到DSPE-PEG的聚乙二醇末端，并利用高效液相色譜分析連接產(chǎn)物。我們利用后插入技術(shù)，將PH1-PEG-DSPE膠束溶液與脂質(zhì)體(HSPC∶Chol∶DSPE-PEG=2∶1∶0.1)共孵育，制備靶向脂質(zhì)體。
　　在體外細(xì)胞試驗(yàn)中，通過(guò)細(xì)胞ELISA技術(shù)，激光共聚焦顯微鏡技術(shù)以及流式細(xì)胞術(shù)，利用對(duì)照多肽P

5、H2，GE11偶聯(lián)的脂質(zhì)體以及普通長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體作為對(duì)照，我們發(fā)現(xiàn)PH1偶聯(lián)的脂質(zhì)體能夠靶向Tie2蛋白高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞，而對(duì)Tie2陰性表達(dá)細(xì)胞結(jié)合較低。利用PH1偶聯(lián)載化療藥物順鉑的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，可以大大的特異性提高順鉑脂質(zhì)體對(duì)Tie2陽(yáng)性細(xì)胞的毒殺作用。除了化療藥物輸送系統(tǒng)，我們還針對(duì)PH1靶向的基因輸送系統(tǒng)進(jìn)行了研究，通過(guò)PH1偶聯(lián)修飾以及局部超聲促進(jìn)基因轉(zhuǎn)染，達(dá)到靶向基因輸送的目的，在體外細(xì)胞試驗(yàn)中得到一定的效果