EGFR信號通路對膠質(zhì)瘤生物學(xué)行為影響的實驗研究.pdf

1、第一部分：EGFR信號通路對人膠質(zhì)瘤細胞系GL15增殖的調(diào)控作用 目的探討EGFR信號通路對于人膠質(zhì)瘤細胞系GL-15細胞增殖及PCNA表達的影響。方法應(yīng)用細胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)GL15細胞，免疫組化法檢測膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)、EGFR表達情況，細胞計數(shù)法檢測不同濃度的EGF對于膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響，分別運用免疫組化法和流式細胞儀檢測不同濃度EGF作用后PCNA表達情況

2、。結(jié)果GFAP在GL15細胞呈散在表達，EGFR明顯的高表達；劑量小于等于lng/ml的EGF對于膠質(zhì)瘤細胞有促增殖作用，與對照組相比，細胞數(shù)目明顯增加，EGF作用后細胞核PCNA的表達明顯增加；而10ng/ml、100ng/ml的EGF對于膠質(zhì)瘤細胞生長有明顯的抑制作用，PCNA的表達明顯減少。結(jié)論GL15細胞為典型的膠質(zhì)母細胞瘤，EGFR信號通路對于膠質(zhì)瘤細胞的生長影響具有雙相調(diào)控作用，小劑量EGF可促進細胞增生，大劑量EGF可抑制

3、細胞生長。 第二部分：EGFR信號通路對膠質(zhì)瘤細胞系GL15增殖雙相調(diào)控的分子機制 目的探討EGFR信號通路對于人膠質(zhì)瘤細胞系GL-15細胞細胞周期及及細胞內(nèi)鈣信號的影響。方法以不同濃度的EGF處理GL15細胞，流式細胞儀檢測細胞周期及凋亡率的改變，激光掃描共聚焦顯微鏡(1aserscanconfocalmicroscope，LSCM)檢測EGF對于細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響。結(jié)果0.1ng/ml、1ng/mlEGF作用

4、后，與對照組相比，G0/G1期細胞比例明顯下降，S期比例增加，10ng/ml、100ng/mlEGF作用以后均出現(xiàn)明顯的亞G1峰，細胞凋亡率明顯升高，EGF可明顯誘導(dǎo)細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增加，但大劑量EGF組誘導(dǎo)的細胞內(nèi)鈣升高的輻度明顯高于小劑量組。結(jié)論小劑量的EGF有促進腫瘤細胞由靜止期轉(zhuǎn)入DNA合成期的作用，大劑量EGF能誘導(dǎo)細胞凋亡并導(dǎo)致細胞的增殖受抑制，EGFR信號通路的差異性調(diào)控可能與細胞內(nèi)鈣信號的差異有關(guān)。 第三部

5、分：轉(zhuǎn)染LRIG1基因?qū)τ谀z質(zhì)瘤細胞增殖及細胞內(nèi)鈣信號的影響 目的探討LRIG1基因?qū)τ谀z質(zhì)瘤細胞系GL15增殖及EGFR信號通路的影響，為膠質(zhì)瘤發(fā)生機制的研究和基因治療提供理論依據(jù)。方法采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將LRIG1-EGFP真核表達載體轉(zhuǎn)染到GL15細胞系中，了解其對細胞增殖能力及細胞周期的影響，應(yīng)用共聚焦顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染后對EGF引起的細胞內(nèi)鈣信號的變化情況。結(jié)果轉(zhuǎn)染LRIG1基因能抑制EGF引起的細胞生長，對細胞周期分析表