阻斷EGFR和mTOR信號通路對C6膠質(zhì)瘤及其干細(xì)胞作用研究.pdf

1、背景:膠質(zhì)瘤耐藥問題至今仍是膠質(zhì)瘤治療中亟待解決的難題，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)瘤中存在少量的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞，在腫瘤遷徙和侵襲性中發(fā)揮關(guān)鍵作用，是膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)和治療抗性的根源。以腫瘤干細(xì)胞作為研究對象，對闡明腦腫瘤發(fā)生發(fā)展機制有重要的價值。表皮生長因子受體(EGFR)是一種具酪氨酸激酶活性的跨膜受體，哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是胞漿中一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，細(xì)胞中EGFR及mTOR兩信號通路對于細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期都有重要作用。將兩者聯(lián)合應(yīng)用于

2、膠質(zhì)瘤及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的作用如何卻鮮有報道。
　　 目的:在細(xì)胞水平研究埃羅替尼(Erlotinib)和雷帕霉素(Rapamycin)單獨及聯(lián)合用藥對腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞及其腫瘤干細(xì)胞(GSCs)的增殖、周期的作用，和細(xì)胞內(nèi)EGFR和mTOR信號通路中基因及蛋白表達(dá)情況，探討及驗證埃羅替尼、雷帕霉素聯(lián)合抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及轉(zhuǎn)移的可能機制，為膠質(zhì)瘤靶向治療提供新的研究切入點。
　　 方法:采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)C6細(xì)胞，

3、獲取C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(GSCs)，細(xì)胞免疫熒光染色檢測CD133和nestin鑒定膠質(zhì)瘤干細(xì)胞;采用CCK-8、RT-PCR和Westernblot技術(shù)檢測經(jīng)埃羅替尼、雷帕霉素干預(yù)后，腫瘤細(xì)胞、膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期與EGFR和mTOR信號通路相關(guān)基因蛋白EGFR、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、rps6k、p-rps6k表達(dá)變化的關(guān)系。
　　 結(jié)果:膠質(zhì)瘤干細(xì)胞表達(dá)CD133、Nestin;埃羅替尼、雷帕

4、霉素對C6及C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞均呈劑量-時間依賴性抗增殖作用（P＜0.05），兩者聯(lián)合用藥抗增殖效果更加明顯。埃羅替尼與雷帕霉素能夠增加G1期細(xì)胞比例，減少S期比例，但C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞對埃羅替尼、雷帕霉素的敏感性低于C6細(xì)胞（P＜0.05）;用藥組與空白組相比，細(xì)胞中EGFR和mTOR通路中相關(guān)蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05），聯(lián)合用藥組效果更明顯。
　　 結(jié)論:膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞系中存在一定的腫瘤干細(xì)胞;埃羅替尼與雷帕霉素通過阻斷E