體外下調NY-SAR-35對膠質瘤細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的:研究NY-SAR-35對膠質瘤細胞惡性生物學行為的影響。
　　方法:
　　(1)用qRT-PCR篩選出高表達NY-SAR-35的膠質瘤細胞;
　　(2)用帶有熒光的特異性干擾NY-SAR-35表達的序列轉染膠質瘤細胞，對轉染條件進行優(yōu)化;
　　(3) CCK-8法檢測干擾NY-SAR-35對膠質瘤細胞生長能力的影響;
　　(4)流式細胞儀檢測干擾NY-SAR-35對膠質瘤細胞周期和凋亡的影響;

2、　　(5) Western blot檢測細胞周期蛋白A(Cyclin A)、細胞周期蛋白激酶2(CDK2)、凋亡相關蛋白caspase-3和caspase-9的表達水平變化;
　　(6)通過Matrigel粘附實驗檢測膠質瘤細胞黏附能力變化;
　　(7)劃痕修復實驗、Transwell遷移實驗檢測膠質瘤細胞遷移能力;
　　(8) Transwell Matrigel侵襲實驗檢測膠質瘤細胞侵襲能力、Wester blot

3、檢測上皮細胞鈣粘蛋白(E-cadherin)和N-鈣粘蛋白(N-cadherin)表達水平變化。
　　結果:
　　(1) NY-SAR-35的蛋白表達可見于細胞質和細胞核中，但主要在細胞核中;選取A172和U251兩株膠質瘤細胞株作為實驗對象;
　　(2)經(jīng)qRT-PCR檢測，篩選出干擾效率最高的兩組干擾序列作為實驗組;
　　(3)CCK-8法檢測發(fā)現(xiàn)，下調NY-SAR-35表達后，兩株膠質瘤細胞增殖能力較對照組

4、顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義;
　　(4)流式細胞儀檢測細胞周期，顯示膠質瘤細胞NY-SAR-35表達下調后，S期細胞增加，G2/M期細胞減少，G0/G1期細胞所占百分比無統(tǒng)計學差異; Westernblot結果顯示NY-SAR-35下調后Cyclin A的表達增加，CDK2減少，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義;
　　(5)流式細胞儀檢測細胞凋亡，結果顯示NY-SAR-35干擾后膠質瘤細胞的凋亡增加，與對照組比較差異具有統(tǒng)計

5、學意義; Western blot結果顯示NY-SAR-35下調后caspase-3的表達增加，與對照組比較其差異具有統(tǒng)計學意義，caspase-9的表達無變化，與對照組比較差異不具有統(tǒng)計學意義;
　　(6)粘附實驗結果顯示在干擾NY-SAR-35后，兩株膠質瘤細胞的黏附能力均下降，與對照組比較其差異具有統(tǒng)計學意義;
　　(7)在劃痕修復實驗中，當干擾NY-SAR-3512小時時，兩株膠質瘤細胞的修復率無統(tǒng)計學意義;當24小

6、時時，實驗組的修復率明顯低于對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義;同時，Transwell遷移實驗顯示下調NY-SAR-35可以導致穿膜細胞數(shù)量減少，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義;
　　(8)Transwell Matrigel侵襲實驗顯示干擾NY-SAR-35后，細胞的穿膜數(shù)量明顯降低;Western blot檢測干擾后E-cadherin的表達量增加，N-cadherin的表達量降低，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結論