NO-1886調(diào)節(jié)2型糖尿病小型豬糖、脂代謝紊亂,抑制腎臟纖維化.pdf

1、研究背景和目的:糖代謝和脂代謝異常具有腎毒性(nephrotoxicity),在糖尿病腎病(DN)的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。流行病學(xué)資料證實(shí)高甘油三酯(TG)血癥是 DN的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素,因此開發(fā)一種調(diào)節(jié)TG代謝的藥物對(duì)預(yù)防和治療DN具有重要意義。脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是清除血漿脂蛋白中所含TG的限速酶。NO-1886是一種脂蛋白脂酶活化劑,可提高分布于毛細(xì)血管表面的LPL活性,降低血漿 TG,升

2、高高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的水平。既往研究顯示NO-1886亦具有降血糖,減輕胰島素抵抗的作用,但是NO-1886對(duì)DN的作用仍不清楚。因此,本碩士論文擬研究高脂高糖高膽固醇飲食對(duì)廣西巴馬小型豬糖、脂代謝和腎臟結(jié)構(gòu)、功能的影響,及NO-1886對(duì)腎臟纖維化的作用。
　　方法:15只雄性廣西巴馬小型豬按體重隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì),分別喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料(CD組)、高脂

3、高糖高膽固醇飼料(HFSCD組)、高脂高糖高膽固醇飼料加1.0％NO-1886(HFSCD+NO-1886組)喂養(yǎng)5個(gè)月。每個(gè)月末取空腹血,測定血漿葡萄糖、胰島素、總膽固醇(total cholesterol, TC)、HDL-C、TG、游離脂肪酸(FFA)水平,計(jì)算 TC/HDL-C比值。每月末進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT),第5月末進(jìn)行胰島素敏感性試驗(yàn)。第0、2、4、5月末取隨機(jī)晨尿,測葡萄糖、微量白蛋白和β-N-乙酰氨基葡萄糖

4、苷酶(NAG)水平。5月后處死動(dòng)物,觀察腎臟大體形態(tài),HE、PAS、Masson和油紅O染色觀察腎臟顯微結(jié)構(gòu),透射電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)。檢測腎臟中TG的含量和LPL、乳酸脫氫酶(LDH)、琥珀酸脫氫酶(SDH)活性,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測LPL和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)mRNA在小型豬腎臟中的表達(dá),免疫印跡技術(shù)檢測腎臟Ⅳ型膠原、TGF-β1和結(jié)締組織生長因子(CTGF)的蛋白表達(dá),免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察TGF-β1、CTGF、Ⅳ型

5、膠原、纖維連接蛋白(FN)、Ⅰ型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的組織定位和相對(duì)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:高脂高糖高膽固醇飼料誘發(fā)廣西巴馬小型豬高血糖、高胰島素血癥、胰島素抵抗和高脂血癥,腎臟TG含量和LDH、SDH活性增加,而LPL活性下降,LPL mRNA表達(dá)亦下降。腎臟結(jié)構(gòu)和功能受損,表現(xiàn)為尿糖、微量白蛋白和NAG升高,腎小球肥大或萎縮,基底膜增厚,足突融合,細(xì)胞外基質(zhì)增生,脂質(zhì)異位

6、蓄積。腎臟TGF-β1 mRNA和蛋白表達(dá)增加,CTGF、Ⅳ型膠原、FN和α-SMA的蛋白表達(dá)增加,Ⅰ型膠原無明顯表達(dá),而MMP-2和MMP-9表達(dá)均下降。NO-1886能顯著降低高脂高糖高膽固醇喂養(yǎng)的小型豬血漿葡萄糖、胰島素、TG、FFA水平和TC/HDL-C比值,升高HDL-C,并能減輕胰島素抵抗,保護(hù)胰島組織結(jié)構(gòu)。NO-1886增加腎臟LPL活性和mRNA的表達(dá),降低組織TG含量和LDH、SDH活性,保護(hù)腎臟組織結(jié)構(gòu)和功能。而且,

7、NO-1886能降低TGF-β1、CTGF和α-SMA的表達(dá),增加MMP-2和MMP-9的表達(dá),減少細(xì)胞外基質(zhì)Ⅳ型膠原和FN的蓄積,抑制腎臟纖維化。
　　結(jié)論:NO-1886具有調(diào)節(jié)糖、脂代謝紊亂,減輕胰島素抵抗,保護(hù)胰島組織結(jié)構(gòu)的作用,并增加腎臟 LPL表達(dá)和活性,減少脂質(zhì)異位蓄積,抑制高脂高糖高膽固醇上調(diào)腎臟TGF-β1、CTGF和α-SMA表達(dá),下調(diào)MMP-2和MMP-9表達(dá)的作用,減少細(xì)胞外基質(zhì)蓄積,抑制腎臟纖維化,保護(hù)腎