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1、目的: 通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)對(duì)延緩糖尿病大鼠腎臟纖維化的作用及其機(jī)制。 方法和結(jié)果: 第一部分:全反式維甲酸對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用方法:SD大鼠給予鏈脲佐菌素(STZ,65mg/kg)腹腔注射,誘導(dǎo)建立糖尿病模型。 實(shí)驗(yàn)分3組: (1)正常對(duì)照組(NC組); (2)糖尿病組(DM組); (3)糖尿病atRA干預(yù)
2、組(DM+atRA組)。從造模成功后第二天開始,DM+atRA組給予20mg/(kg·d)的全反式維甲酸原料藥溶于適量純花生油中灌胃,而DM組和NC組給予等量的純花生油灌胃。成模后第12周時(shí)處死大鼠測(cè)定血糖、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),測(cè)定24小時(shí)尿蛋白(Ualb)、尿肌酐,計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、計(jì)算腎重/體重比值,檢測(cè)腎臟病理變化,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 1.一般狀況:DM組、DM+atRA組大鼠出
3、現(xiàn)消瘦,多飲、多食、多尿,兩組并無明顯差異,而NC組則無上述情況出現(xiàn)。 2.生化指標(biāo):DM+atRA組與DM組血糖無明顯差異(P>0.05),但兩組均明顯高于NC組(P<0.01);DM+atRA組BUN、Ccr、24小時(shí)尿蛋白較DM組顯著下降(P<0.01),但均高于NC組,差別有顯著性(P<0.01);。 3.腎臟肥大指數(shù):DM組腎重/體重與NC組比較顯著增加(P<0.01),DM+atRA組低于DM組(P<0.05
4、),但高于NC組,差別有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.01)。 4.光鏡HE及PAS染色示:NC組無異常,DM+atRA組、DM組均顯示腎小球系膜細(xì)胞增生,系膜基質(zhì)增多,但DM+atRA組較DM組有明顯好轉(zhuǎn)。 5.電鏡結(jié)果示:DM+atRA組、DM組腎小球基底膜較NC組明顯增厚,足突融合,atRA組基底膜較DM組薄,足突融合減輕。 第二部分: 全反式維甲酸防治糖尿病大鼠腎臟纖維化的機(jī)制探討方法:同第一部分制作糖尿病大
5、鼠模型分組干預(yù)。成模后第12周處死大鼠取腎組織通過免疫組織化學(xué)方法觀察轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、骨形成蛋白-7(BMP-7)、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)重要成份IV、III型膠原表達(dá)及通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)腎組織TGF-β1mRNA、BMP-7mRNA表達(dá)并進(jìn)行相對(duì)定量分析。 結(jié)果: 1. 免疫組化結(jié)果顯示:與DM組相比,DM+atRA組大鼠腎組織BMP-7表達(dá)增加(P<0.01),主要表達(dá)于大鼠腎小管上皮細(xì)胞,T
6、GF-β1表達(dá)減少(P<0.01),ECM重要成分ColIV、colIII表達(dá)減少(P<0.01),且前者與后三者分別呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.86,P<0.01;r=-0.75,P<0.01;r=-0.71,P<0.01)。 2. 熒光定量PCR結(jié)果顯示:與DM組相比,DM+atRA組BMP-7mRNA水平顯著升高(P<0.01),TGF-β1mRNA水平下降(P<0.01),且兩者呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.83,P<0.01)。
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