棉酚對(duì)2型糖尿病大鼠糖、脂代謝和肝纖維化的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察棉酚對(duì)2型糖尿病大鼠血糖、血脂、血胰島素水平的影響,探討11 β-HSD1、GR、PEPCK、G6Paes在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的作用及棉酚降血糖、降血脂、改善胰島素抵抗的作用機(jī)制. 方法:雄性SD大鼠30只分成三組:正常對(duì)照組10只、2型糖尿病對(duì)照組10只、棉酚干預(yù)組10只.后二組喂以高脂飼料(飼料組成:10.1﹪豬油,20.0﹪蔗糖,2.5﹪膽固醇,1.0﹪膽酸鹽,66.5﹪常規(guī)飼料)一個(gè)月,誘發(fā)胰島素抵抗.糖尿病組、棉酚

2、干預(yù)組大鼠在禁食12h后按30mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素(溶于0.1mmol/L枸椽酸緩沖液內(nèi),PH=4.0),注射后1周測(cè)空腹血糖,≥8mmol/L為模型成功.正常對(duì)照組腹腔注射等容積枸椽酸緩沖液.此后,棉酚干預(yù)組按15mg.kg<-1>.d<'-1>劑量棉酚灌胃4周,從第5周起,按15mg/kg劑量棉酚每周給予維持劑量一次至第12周末.正常對(duì)照組與糖尿病對(duì)照組給予等容積的2﹪羧甲基纖維素灌胃,灌胃次數(shù)及時(shí)間同棉酚干預(yù)組.治療結(jié)束,

3、禁食12小時(shí)后處死大鼠,觀測(cè)以下指標(biāo):(1)生化檢測(cè)血糖、TC、TG、LDL-c、HDL-c、Na<'+>、K<'+>水平.(2)ELISA法檢測(cè)血皮質(zhì)酮水平,放免法檢測(cè)血胰島素水平.(3)制作肝組織勻漿,提取總RNA,用半定量RT-PCR方法觀察大鼠肝臟11 β-HSD1、GR、PEPCK、G6Pase基因的表達(dá).(4)免疫組化方法測(cè)定11 β-HSD1、GR的蛋白表達(dá)水平. 方法：雄性SD大鼠30只分成三組:正常對(duì)照組10只

4、、2型糖尿病對(duì)照組10只、棉酚干預(yù)組10只.后二組喂以高脂飼料(飼料組成:10.0﹪豬油,20.0﹪蔗糖,2.5﹪膽固醇,1.0﹪膽酸鹽,66.5﹪常規(guī)飼料)一個(gè)月,誘發(fā)胰島素抵抗,糖尿病組和棉酚干預(yù)組大鼠在禁食12h后按30mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素(溶于0.1mmol/L枸椽酸緩沖液內(nèi),PH=4.0),注射后1周測(cè)空腹血糖,≥8mmol/L為模型成功.正常對(duì)照組腹腔注射等容積枸椽酸緩沖液.此后,棉酚干預(yù)組按15mg.kg<'-1>

5、.d<'-1>劑量棉酚灌胃連續(xù)4周,從第5周起,按15mg/kg劑量棉酚每周給予維持劑量一次,連續(xù)灌胃至第12周末.正常對(duì)照組與糖尿病對(duì)照組給予等容積的2﹪羧甲基纖維素灌胃,灌胃次數(shù)及時(shí)間同棉酚干預(yù)組.治療結(jié)束,禁食12小時(shí)后處死大鼠,觀測(cè)以下指標(biāo):(1)生化檢測(cè)ALT、AsT、ALB水平.(2)放免法檢測(cè)血透明質(zhì)酸水平.(3)取新鮮肝組織,10﹪福爾馬林固定,常規(guī)石蠟切片,HE、Masson染色,光鏡觀察肝臟組織的形態(tài)學(xué)改變.(4)取

6、新鮮肝組織,2.5﹪戊二醛固定,常規(guī)脫水、包埋,超薄切片,電鏡觀察肝臟超微結(jié)構(gòu).(5)制作肝組織勻漿,提取總RNA,用半定量RT-PCR方法觀察大鼠肝臟基因TIMP-1、TIMP-2、MMP-2 mRNA的表達(dá).(6)免疫組化方法測(cè)定α-SMA和TGFβ1、NF-kB蛋白表達(dá)水平. 結(jié)論 1、棉酚可明顯改善2型糖尿病大鼠肝臟纖維化病變. 2、棉酚可降低肝臟TIMP-1、TIMP-2mRNA的表達(dá),升高M(jìn)MP-2m

7、RNA的表達(dá),這可能是其減輕2型糖尿病大鼠肝纖維化的機(jī)制之一. 3、棉酚可降低肝臟內(nèi)TGF β 1和NF-k B、α-SMA蛋白的表達(dá),從而抑制星形細(xì)胞的活化與增殖因而延緩2型糖尿病大鼠肝纖維化的進(jìn)展.糖皮質(zhì)激素在糖、蛋白、脂肪等物質(zhì)和水鹽代謝以及在應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用.糖皮質(zhì)激素一方面通過(guò)誘導(dǎo)糖異生的關(guān)鍵酶PEPCK、G6Pase增加肝糖輸出,另一方面,抑制肝外組織對(duì)葡萄的攝取和利用,參與2型糖尿病的病理生理過(guò)程.11β

8、羥基甾體脫氫酶1(1lbeta-ydroxysteroid dehydrogenase type1)是糖皮質(zhì)激素的代謝酶,在體內(nèi)負(fù)責(zé)無(wú)活性的可的松(嚙齒類(lèi)動(dòng)物為11-去氫皮質(zhì)酮)和有活性的皮質(zhì)醇(嚙齒類(lèi)動(dòng)物為皮質(zhì)酮)之間的相互轉(zhuǎn)換.雖然轉(zhuǎn)換是雙向的,但該酶在體內(nèi)主要發(fā)揮還原酶作用,在受體前水平產(chǎn)生有活性的糖皮質(zhì)激素,增強(qiáng)糖皮質(zhì)激素受體的激活作用<'[1]>.因此,推論,11β HSDl活性異?？赡芘c2型糖尿病有關(guān),抑制或下調(diào)11βHSD