雞傳染性支氣管炎S1基因在大腸桿菌中的表達及其生物活性的初步鑒定.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(InfectiousBronchitisIB)是由冠狀病毒科(Coronavrindac)冠狀病毒屬(Coro-navirus)的傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性高度接觸性傳染病。此病在世界各地均有發(fā)生，給全球養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。S1蛋白是宿主的主要保護性抗原，能誘導機體產(chǎn)生中和抗體和血凝抑制抗體，繼而使機體得到保護，并決定病毒的組織親嗜性，在病毒血清學分類中起主要作用。在免疫學方面起著重要作用的S1

2、蛋白一直是研究的熱點。S1基因很容易發(fā)生變異，使IBV不斷出現(xiàn)新的血清型，使養(yǎng)殖過程中經(jīng)常出現(xiàn)部分免疫或免疫失敗，并出現(xiàn)不同的疾病類型。 本研究利用PCR技術將雞傳染性支氣管炎病毒S1基因分成A段和B段擴增，并將擴增產(chǎn)物克隆到pGEX-6p-1原核表達載體中，酶切鑒定陽性重組菌，并送測序公司測序。利用IPTG進行導表達，SDS-PAGE電泳結果顯示有明顯融合蛋白表達條帶和部分不完全表達蛋白條帶。通過IBV特異性抗體的Wester

3、n-blot檢測，兩段表達產(chǎn)物均能與抗體發(fā)生特異性反應，證明表達產(chǎn)物具有部分抗原性。 將兩個重組質粒用IPTG低溫大量誘導表達，收集菌體，超聲波破碎包涵體，用GlutathioneSepharose4B純化出A段和B段的GST融合蛋白。將純化得到的GST融合蛋白包被ELISA板，進行間接ELISA試驗，結果表明A、B兩段融合蛋白均有良好的抗原性。 將純化得到的融合蛋白加佐劑免疫家兔，連續(xù)免疫3次，將得到的抗體與200TO