具QS干擾活性微生物的篩選及銅綠假單胞菌臨床分離株的生物檢測.pdf

1、近來研究發(fā)現(xiàn)，一些動植物病原菌利用群體感應系統(tǒng)（Quorum sensing,QS）調(diào)節(jié)毒性因子的表達。QS干擾物（Quorum sensing inhibitor,QSI）通過阻斷病原菌的QS系統(tǒng)而起抗病作用，但不殺死細菌，因此不大可能誘導細菌產(chǎn)生抗性。目前QS干擾物的篩選已成為世界范圍內(nèi)的研究熱點之一。 本研究根據(jù)非酶類QSI的特點，建立了微生物初篩模型，即以胡蘿卜軟腐歐文氏菌（Erwinia carotovora）SCGl

2、為報告菌，以馬鈴薯為測試植物，篩選具有抗病活性的微生物。通過該模型篩選到312株對E.carotovora SCGl的致病力具有明顯抑制作用的菌株。抑菌圈檢測得到對SCGl生長沒有抑制作用的3株細菌B6-5、B38、B35。菌株B6-5的抗病效果最好，作QS干擾的進一步驗證和檢測分析。 在混有適量報告菌根癌土壤桿菌（Agrobacteriun tumefaciens）WCF47、AHL信號產(chǎn)生菌E.carotovora SCGl

3、或E.coli DH5α（pJZ365）、X-gal的ABM檢測培養(yǎng)基上打孔，點樣孔中加入B6-5滅酶培養(yǎng)上清液，培養(yǎng)12h后，發(fā)現(xiàn)點樣孔周圍出現(xiàn)了和藍色背景反差明顯的白色圈（非透明圈），而液體LB對照周圍無白色圈，說明：B6-5滅酶培養(yǎng)上清液中的確存在干擾E.carotovora SCGl和E.coliDH5α（pJZ365）QS系統(tǒng)的活性物。 將A.tumefaciens WCF47接入混有B6-5滅酶培養(yǎng)上清液和AHL粗提

4、物的培養(yǎng)基中，經(jīng)4h培養(yǎng)，測β-半乳糖苷酶酶活。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加了菌株B6-5滅酶培養(yǎng)上清液的樣品組的β-半乳糖苷酶活性和清水對照組相比沒有明顯變化（反而稍高），說明B6-5滅酶培養(yǎng)上清液對AHL信號合成后的作用過程無影響。 E.coli DH5α（pJZ365）接入添加了B6-5滅酶培養(yǎng)上清液的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，定時取樣制備上清液。以WCF47為指示菌，用混有X-gal的瓊脂條檢測AHL信號的產(chǎn)生量。結(jié)果顯示，待測樣下端的藍斑明