阿托伐他汀對(duì)老年性癡呆早期模型大鼠額葉皮層炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 以去卵巢并注射D-半乳糖的大鼠為老年性癡呆早期模型，觀察阿托伐他汀對(duì)大鼠額葉皮層炎癥因子IL-6、TNF-α，抗氧化酶SOD2、CAT的表達(dá)及凋亡相關(guān)蛋白Bxl-2、Bax含量的影響。
　　 方法：
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
　　 選用4月齡雌性SD大鼠40只，隨機(jī)分為2組：假手術(shù)組（Sham組）、去卵巢組（OVX組），其中Sham組8只、OVX組32只。Sham組為雙側(cè)去除少量卵巢上脂肪組織

2、，OVX組為去除雙側(cè)卵巢。手術(shù)2周后，Sham組腹腔注射生理鹽水0.5 ml/d；OVX組腹腔注射D-半乳糖20 mg·0.5 ml/d。注射6周后，將OVX組隨機(jī)分為4組：病理對(duì)照組（OD），阿托伐他汀組（ODA），Vc+Ve組（ODV）及旋覆花組（ODI），每組8只。各組均灌胃4周，灌胃劑量如下：ODA組7.2mg/Kg·d，ODV組Vc45 mg/Kg·d Ve27 mg/Kg·d，ODI組0.9 g/Kg·d，Sham組及OD組

3、蒸餾水1.5 ml/Kg·d。灌胃過程中Sham組繼續(xù)注射生理鹽水，其余4組繼續(xù)注射D-半乳糖，所有各組均在灌胃4周后處死。整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期共為12周（術(shù)后到處死）。
　　 2、行為學(xué)測(cè)試
　　 注射D-半乳糖及生理鹽水四周后，用Morris水迷宮對(duì)所有大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練，4次/天，共四天。注射D-半乳糖及生理鹽水六周后同樣條件下進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)1天，方法同上，以后三次逃避潛伏期（escape latencv）的

4、平均值作為評(píng)價(jià)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。動(dòng)物處死前一天，同樣條件下水迷宮實(shí)驗(yàn)1天，記錄大鼠后三次逃避潛伏期的平均值，作為評(píng)價(jià)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。
　　 3、組織標(biāo)本的獲取及指標(biāo)測(cè)定
　　 3.1組織標(biāo)本的獲取
　　 麻醉大鼠，開顱并迅速分離額葉皮層置于液氮中，于-80℃低溫冰箱保存，用于組織總RNA和蛋白的提取。
　　 3.2 mRNA的測(cè)定
　　 用Trizol法提取額葉皮層組織總RN

5、A。用β-actin作為內(nèi)參照，RT-PCR法測(cè)定額葉皮層IL-6mRNA、TNF-αmRNA、SOD2 mRNA、 CAT mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　 3.3蛋白的測(cè)定
　　 提取額葉皮層組織蛋白并用Bradford法測(cè)定蛋白含量，以每毫升樣品中的毫克蛋白量（mg/ml）表示。以β-actin為內(nèi)參照，用western-blotting法分別檢測(cè)Bcl-2和Bax的相對(duì)含量。
　　 結(jié)果：
　　 1、

6、大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化
　　 各組大鼠逃避潛伏期隨訓(xùn)練次數(shù)增加而縮短，取后三次逃避潛伏期的平均值進(jìn)行觀察，OVX組逃避潛伏期明顯長(zhǎng)于Sham組（P<0.05）；給藥后，ODA+ODV+ODI組逃避潛伏期明顯短于OD組（P<0.05）。
　　 2、大鼠額葉皮層IL-6mRNA水平的變化
　　 OD組的IL-6mRNA的相對(duì)表達(dá)量比Sham組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與oD組相比，ODA組、ODV組和oDI組的

7、IL-6mRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯降低；在用藥各組中，ODV組的IL-6mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Sham組相比無顯著性差異。
　　 3、大鼠額葉皮層TNF-αmRNA水平的變化
　　 OD組的TNF-αmRNA的相對(duì)表達(dá)量比Sham組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的TNF-αmRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯降低；而且三個(gè)用藥組的TNF-αmRNA的相對(duì)表達(dá)量與Sham組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。<

8、br>　　 4、大鼠額葉皮層SOD2 mRNA水平的變化
　　 與Sham組相比，OD組的SOD2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯降低；與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的SOD2mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯升高；在用藥各組中，ODV組的SOD2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Sham組相比無顯著性差異。
　　 5、大鼠額葉皮層CAT mRNA水平的變化
　　 OD組的CAT mRNA的相對(duì)表達(dá)量比Sham組明顯降低，差

9、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODA組和ODV組的CAT mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯升高，而ODI組的CAT mRNA的相對(duì)表達(dá)量與OD組相比無顯著性差異；在用藥各組中，ODA組和ODV組的CAT mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Sham組相比無顯著性差異。
　　 6、大鼠額葉皮層Bcl-2相對(duì)含量的變化
　　 OD組的Bcl-2相對(duì)表達(dá)量比Sham組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的Bcl

10、-2相對(duì)表達(dá)量無顯著差異；用藥各組Bcl-2相對(duì)表達(dá)量與Sham組相比均明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 7、大鼠額葉皮層Bax相對(duì)含量的變化
　　 OD組的Bax相對(duì)表達(dá)量比Sham組顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的Bax相對(duì)表達(dá)量明顯下降；用藥各組Bax相對(duì)表達(dá)量與Sham組相比均無顯著差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、阿托伐他汀，Vc+Ve，旋覆花能改善去