濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)與自身免疫性皰病的相關(guān)性研究.pdf

1、自身免疫性皰?。╝utoimmune bullous diseases,ABD）是一類(lèi)臨床常見(jiàn)的自身免疫性疾病，臨床特征為皮膚紅斑、水皰、大皰、糜爛，多發(fā)于中老年人，病情頑固且易反復(fù)發(fā)作。ABD包括兩大類(lèi)：表皮內(nèi)皰病和表皮下皰病，前者以天皰瘡（pemphigus）最為多見(jiàn)，后者則以大皰性類(lèi)天皰瘡（bullous pemphigoid，BP）為典型代表。
　　目前由致病性自身抗體介導(dǎo)的皰病免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制已得到公認(rèn)，致病性自身抗體與靶

2、抗原結(jié)合，引起一系列免疫炎癥反應(yīng)，如激活補(bǔ)體、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、釋放蛋白酶或溶酶體酶等，破壞在表皮細(xì)胞間或真表皮間黏附中起重要作用的結(jié)構(gòu)分子，或直接影響結(jié)構(gòu)分子的功能，導(dǎo)致表皮內(nèi)或表皮下水皰、大皰的發(fā)生。近年來(lái)該類(lèi)疾病免疫學(xué)發(fā)病機(jī)理的研究取得了很大進(jìn)展，明確尋常型天皰瘡（PV）和落葉型天皰瘡（PF）的主要靶抗原分別為橋粒芯糖蛋白3（Dsg3）和橋粒芯糖蛋白1（Dsg1），BP的主要靶抗原為大皰性類(lèi)天皰瘡抗原1（BPAG1，BP230）和大皰性

3、類(lèi)天皰瘡抗原2（BPAG2，BP180），但是致病性自身抗體的來(lái)源及其產(chǎn)生機(jī)理尚不清楚。
　　以往研究表明，T細(xì)胞依賴(lài)抗原（TD抗原）刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體必需CD4+輔助性T細(xì)胞（Th）的輔助?？贵w分泌細(xì)胞產(chǎn)生于外周淋巴器官（淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體和派氏集合淋巴結(jié)等）的生發(fā)中心（Germinal Centers,GC），并在那里發(fā)生體細(xì)胞高頻突變、抗體類(lèi)別轉(zhuǎn)換和高親和力的選擇。Th在GC的形成，選擇高親和力B細(xì)胞分化為記憶細(xì)胞或漿細(xì)胞

4、，以及維持長(zhǎng)時(shí)間的體液免疫應(yīng)答等過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。近期研究證實(shí)，體液免疫中輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的T細(xì)胞亞群為濾泡輔助性T細(xì)胞（T follicular helper cells,Tfh）。Tfh定位于淋巴濾泡，轉(zhuǎn)錄因子為Bcl-6，主要通過(guò)分泌白細(xì)胞介素21（IL-21）發(fā)揮作用，其膜表面高表達(dá)CXCR5、ICOS、PD-1、CD40L等，通過(guò)與B細(xì)胞表面相應(yīng)的配體或受體相互結(jié)合輔助B細(xì)胞產(chǎn)生高親和力抗體。
　　Tfh水平的異

5、常與自身免疫性疾病的發(fā)病密切相關(guān)。在多種自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）、重癥肌無(wú)力（MG）等患者或動(dòng)物模型中均發(fā)現(xiàn)GC的形成和自身抗體的產(chǎn)生涉及Tfh細(xì)胞的異常。在小鼠模型中，阻斷Tfh重要相關(guān)分子的功能，如ICOS、CD40L、IL-21等，則導(dǎo)致自身抗體產(chǎn)生下降。鑒于目前自身免疫性皰病的自身抗體來(lái)源及產(chǎn)生機(jī)制尚不明確，而Tfh的主要功能是輔助B細(xì)胞產(chǎn)生高親和力抗體，我們推測(cè)Tfh參與介導(dǎo)了自身免疫性

6、皰病自身抗體的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)天皰瘡和大皰性類(lèi)天皰瘡患者外周血中Tfh細(xì)胞水平，初步探索Tfh是否參與了ABD的發(fā)病，是否在ABD發(fā)病中輔助B細(xì)胞產(chǎn)生功能性抗體引起一系列免疫損傷，以期對(duì)ABD的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探索，并為ABD的治療提供新的思路。
　　目的：探索Tfh細(xì)胞與天皰瘡和大皰性類(lèi)天皰瘡為代表的自身免疫性皰病的相關(guān)性。
　　方法：收集天皰瘡和大皰性類(lèi)天皰瘡患者及健康對(duì)照者外周血，提取外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）

7、并分離血清，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)患者和正常對(duì)照者外周血中Tfh細(xì)胞水平，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)患者和正常對(duì)照者血清中IL-21水平，分析Tfh和IL-21在患者與正常對(duì)照者中的差異以及與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系，分析Tfh與ABD發(fā)病的相關(guān)性。
　　結(jié)果：大皰性類(lèi)天皰瘡患者外周血中Tfh水平高于健康對(duì)照者（中位數(shù)分別為11.25％和4.95％,P<0.001）；Tfh水平與反映病情嚴(yán)重程度的抗BP180-NC16A抗體滴度

8、呈正相關(guān)（R=0.712,P<0.01）；大皰性類(lèi)天皰瘡患者血清中IL-21水平高于健康對(duì)照組（中位數(shù)分別為103.98pg/ml和46.77pg/ml,P<0.001），且IL-21水平與其血清中抗BP180-NC16A滴度呈正相關(guān)（R=0.578,P=0.030）；治療后，隨著患者病情的緩解及抗體滴度的下降，其外周血中Tfh水平較治療前下降（中位數(shù)分別為10.50％和4.10％,P=0.003），治療后血清中IL-21水平也較治療前

9、下降（中位數(shù)分別為99.98pg/ml和64.08pg/ml,P=0.012）。
　　天皰瘡患者外周血中Tfh水平高于健康對(duì)照組（中位數(shù)分別為10.00％和4.80％,P=0.001），血清中IL-21水平也高于正常對(duì)照組（中位數(shù)分別為72.84pg/ml和60.34pg/ml,P=0.011）；治療后，隨著患者病情的緩解，其外周血中Tfh細(xì)胞比例較治療前下降（中位數(shù)分別為9.90％和5.00％，P=0.018），其治療后IL-2

10、1水平較也治療前下降（中位數(shù)分別為84.46pg/ml和69.58pg/ml,P=0.028）。
　　結(jié)論：以天皰瘡和大皰性類(lèi)天皰瘡為代表的ABD患者外周血Tfh細(xì)胞及其分泌的主要細(xì)胞因子IL-21水平均明顯升高，且BP患者中Tfh及IL-21水平均與反映病情嚴(yán)重程度的特異性抗體滴度呈正相關(guān)；治療后，隨著疾病緩解，患者外周血中Tfh及IL-21水平均顯示出較治療前下降趨勢(shì)。以上結(jié)果提示Tfh可能在ABD發(fā)病過(guò)程中起著重要作用，且與