髓系來源的抑制性細(xì)胞通過抑制濾泡輔助性T細(xì)胞介導(dǎo)乙型腦炎病毒免疫逃逸機(jī)制的研究.pdf

1、日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)是黃病毒科黃病毒屬的成員之一，又簡稱乙腦病毒。此病毒屬于嗜神經(jīng)病毒，以攜帶病毒的蚊蟲為傳播媒介在豬、水禽和人類之間進(jìn)行傳播，引起嚴(yán)重的人獸共患傳染病乙型腦炎(Japanese encephalitis，JE)，簡稱乙腦。隨著全球氣候變暖，人類與自然界攜帶病原生物的接觸增加，蟲媒疾病愈演愈烈，乙型腦炎的流行也呈現(xiàn)上升趨勢。針對乙腦的預(yù)防和防治，雖然滅活苗和弱

2、毒苗在亞洲已使用數(shù)十年，但乙腦仍在流行，并被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為二類動(dòng)物疫病。鑒于乙腦的流行區(qū)域不斷擴(kuò)大，流行能力不斷增強(qiáng)，而且在無免疫力的人群中造成的毀滅性流行，開發(fā)有效的抗病毒療法以及尋找替代治療以減少發(fā)病迫在眉睫。
　　目前關(guān)于JEV感染后發(fā)病機(jī)制的研究，主要集中在血腦屏障(BBB)的破壞以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的免疫應(yīng)答，而經(jīng)外周途徑感染的JEV進(jìn)入CNS的先決條件是逃逸機(jī)體的免疫監(jiān)視。然而，JEV逃逸免疫應(yīng)答

3、的機(jī)制尚不清楚。鑒于免疫抑制在病原介導(dǎo)的免疫逃逸過程中發(fā)揮的重要作用，本研究以髓系來源的抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)為主要的研究對象，擬在JEV感染小鼠模型中尋找新的免疫抑制通路。
　　本研究發(fā)現(xiàn)在JEV感染的小鼠模型中先天免疫細(xì)胞MDSCs通過抑制適應(yīng)性免疫應(yīng)答從而介導(dǎo)JEV逃逸外周免疫監(jiān)視。
　　首先，本研究采用尾靜脈注射JEV于6w-8w雌性C57BL/6小

4、鼠中，流式或者實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)檢測分析與免疫抑制相關(guān)的細(xì)胞或者細(xì)胞因子，結(jié)果顯示:JEV感染誘導(dǎo)MDSCs、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（regulatoryT cells，Tregs）的比例在小鼠脾臟中均顯著增加，細(xì)胞因子IL-10在脾臟中的表達(dá)也明顯上調(diào)。隨后，本研究探討了MDSCs、Tregs和IL-10對JEV感染后小鼠體重、發(fā)病以及存活率的影響，結(jié)果顯示:MDSCs對小鼠的發(fā)病進(jìn)程有直接促進(jìn)作用，而Treg

5、s和IL-10對小鼠的存活率無顯著影響。
　　其次，為進(jìn)一步研究MDSCs的作用機(jī)制，本研究檢測了JEV感染早期小鼠脾臟中CD4+T細(xì)胞尤其是濾泡輔助性T(T follicular helper，Tfh)細(xì)胞的變化，結(jié)果表明:JEV感染早期，小鼠脾臟中Tfh細(xì)胞的比例顯著下降，隨后，CD19+B細(xì)胞和漿細(xì)胞(CD19+CD138+)的比例也明顯降低。并且感染小鼠體內(nèi)剔除MDSCs后，Tfh細(xì)胞、B細(xì)胞和漿細(xì)胞的比例恢復(fù)到正常水平。

6、
　　最后，本研究檢測分析了JEV誘導(dǎo)產(chǎn)生的MDSCs對Tfh細(xì)胞介導(dǎo)的抗體應(yīng)答的影響，結(jié)果顯示:IgM的分泌在JEV感染早期顯著受到抑制，而在剔除MDSCs后，IgM的分泌水平明顯增加，同時(shí)JEV中和抗體的滴度也顯著增加。
　　綜上所述，本研究首次提出了MDSCs通過抑制Tfh的功能進(jìn)而影響體液免疫應(yīng)答，從而介導(dǎo)了JEV的免疫逃逸;這些發(fā)現(xiàn)也表明，在病毒感染過程中，先天性免疫細(xì)胞調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答的重要性;為JE和其它的感