SHE78-7增強(qiáng)宮頸癌HCE1多細(xì)胞球體對(duì)順鉑的敏感性及對(duì)E-cadherin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究E-cadherin單克隆抗體SHE78-7增強(qiáng)宮頸癌HCE1多細(xì)胞球體對(duì)順鉑的敏感性及對(duì)E-cadherin表達(dá)的影響。 方法:(一)運(yùn)用液體重疊法和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)法培養(yǎng)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體。(二)觀察E-cadherin單克隆抗體SHE78-7作用于HCE1多細(xì)胞球體后的形態(tài)學(xué)的變化。(三)GST-1法檢測(cè)SHE78-7阻斷細(xì)胞黏附前后,不同濃度梯度的順鉑對(duì)HCE1多細(xì)胞球體的增殖抑制作用,以單層細(xì)胞作為對(duì)照,分別計(jì)算I

2、C50值,多細(xì)胞耐藥指數(shù)MCRI,并繪制濃度.抑制率曲線。(四)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)SHE78-7干預(yù)前后HCE1多細(xì)胞球體中E-cadherin的表達(dá),以單層細(xì)胞作為對(duì)照。
　　結(jié)果:(一)多細(xì)胞球體的培養(yǎng):HCE1細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài):顯微鏡下見(jiàn)HCE1細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)24小時(shí)可見(jiàn)細(xì)胞聚集成團(tuán),并隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),結(jié)構(gòu)更加緊密,直徑逐漸增大,第4天可出現(xiàn)中心壞死。(二)SHE78-7作用于HCE1多細(xì)胞球體后的形態(tài)學(xué)的變化:單層

3、細(xì)胞對(duì)照組:細(xì)胞之間連接緊密,成片生長(zhǎng),加入SHE78-7后:細(xì)胞之間連接疏松;多細(xì)胞球體對(duì)照組:細(xì)胞能夠形成多細(xì)胞球體,球體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,加入SHE78-7后則不能形成多細(xì)胞球體,或者細(xì)胞雖然聚集在一起,但結(jié)構(gòu)松散,易吹散。(三)GST-1法檢測(cè)SHE78-7阻斷細(xì)胞黏附前后,不同濃度梯度的順鉑對(duì)HCE1多細(xì)胞球體的增殖抑制作用,以單層細(xì)胞作為對(duì)照:SHE78-7阻斷細(xì)胞黏附前:順鉑作用于單層細(xì)胞的IC502D:6.04mg/ml,多細(xì)胞

4、球體的IC503D:18.32mg/ml,MCRI:3.03。SHE78-7阻斷細(xì)胞黏附后:順鉑作用于單層細(xì)胞的IC502D’:3.17mg/ml,多細(xì)胞球體的IC503D’:6.96mg/ml,MCRI’:2.19?？梢?jiàn)SHE78-7作用后,多細(xì)胞耐藥指數(shù)MCRI明顯降低,可增強(qiáng)HCE1多細(xì)胞球體對(duì)順鉑的敏感性。(四)免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)SHE78-7干預(yù)HCE1多細(xì)胞球體前后E-cad的表達(dá),以單層細(xì)胞作為對(duì)照:染色陽(yáng)性表現(xiàn)為棕黃色

5、顆粒,單層細(xì)胞主要表達(dá)在胞膜,多細(xì)胞球體胞膜,胞漿都有表達(dá)。①HCE1多細(xì)胞球體表達(dá)E-cad較HCE1單層細(xì)胞明顯增高(P<0.05)。②SHE78-7作用HCE1單層細(xì)胞和多細(xì)胞球體前后,E-cad的表達(dá)無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論:1、抗E-cadherin的單克隆抗體SHE78-7對(duì)HCE1多細(xì)胞球體有解聚作用,并能抑制多細(xì)胞球體的形成。2、SHE78-7能增強(qiáng)HCE1多細(xì)胞球體對(duì)順鉑的敏感性。3、SHE78-7能夠有效抑制HC