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文檔簡介
1、背景:喉癌是我國較為常見的惡性腫瘤,目前臨床上早期喉癌主要選擇手術(shù)治療,中晚期選擇綜合治療,然而中晚期治療效果并不理想?;熕幬锊幻舾惺菍?dǎo)致腫瘤治療效果不佳的一個(gè)重要因素。順鉑作為喉癌化療的首選用藥,順鉑耐藥的出現(xiàn)削弱了化療藥物的作用。FoxM1( forkhead box protein M1)是 Forkhead box(FOX)家族中的一員,僅表達(dá)于增殖活躍的細(xì)胞,參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化、凋亡。FoxM1高表達(dá)于多種腫瘤,參
2、與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。近年來,F(xiàn)oxM1與腫瘤化療敏感性相關(guān)的報(bào)道越來越多。硫鏈絲菌肽(thiostrepton, TST)是一種天然 FoxM1抑制劑。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)FoxM1在喉癌組織中高表達(dá),硫鏈絲菌肽可以特異性的抑制喉癌Hep-2細(xì)胞Foxm1的表達(dá),但是目前喉癌的化療敏感性與FoxM1表達(dá)是否相關(guān)尚不清楚,
目的:通過 siRNA以及硫鏈絲菌肽分別下調(diào) FoxM1表達(dá),探討Foxm1對(duì)人喉癌Hep-2細(xì)胞順鉑敏感
3、性的影響及其可能機(jī)制。
方法:分別選用FoxM1 siRNA以及FoxM1特異性抑制劑(硫鏈絲菌肽)兩種方式下調(diào)Hep-2細(xì)胞FoxM1表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western Blot檢測分別使用 siRNA或硫鏈絲菌肽處理細(xì)胞后 FoxM1 mRNA、蛋白表達(dá)水平的變化;MTT法檢測順鉑分別作用于兩種方式作用下 FoxM1表達(dá)下調(diào)的 Hep-2細(xì)胞株,其細(xì)胞存活率及順鉑 IC50變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測siRNA或硫鏈絲菌肽下
4、調(diào)FoxM1表達(dá)后順鉑誘導(dǎo)的Hep-2細(xì)胞凋亡率變化情況;實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western Blot法檢測順鉑作用siRNA或硫鏈絲菌肽分別處理下的FoxM1下調(diào)組及對(duì)照組細(xì)胞,凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax變化情況。
結(jié)果:siRNA及硫鏈絲菌肽均能下調(diào)FoxM1表達(dá)(P<0.05);兩種方式均能降低順鉑作用下細(xì)胞存活率以及IC50。siRNA法處理后兩組IC50依次為:NC組順鉑IC50=2.61±0.102,干擾組IC
5、50=0.771±0.058, P<0.05;硫鏈絲菌肽法處理后兩組IC50依次為:對(duì)照組順鉑IC50=2.142±0.199,抑制劑組IC50=0.773±0.063,P<0.05。兩種方式均能提高凋亡率。siRNA法處理后四組凋亡率依次為:NC組(4.1967±0.2727)%、干擾組(12.5533±0.1828)%、NC+順鉑組(37.465±4.305)%、干擾+順鉑組(82.3733±7.2142)%,P<0.05;硫鏈絲菌
6、肽法后四組凋亡率依次為:對(duì)照組(2.3433±0.1936)%、抑制劑組(10.1267±0.4788)%、順鉑組(35.075±1.995)%、抑制劑+順鉑組(62.8433±1.8241)%, P<0.05。兩種方式下調(diào)FoxM1表達(dá),Bcl-2(凋亡抑制蛋白)表達(dá)與FoxM1一致,Bax(促凋亡蛋白)表達(dá)則與之相反(P<0.05)。
結(jié)論:下調(diào)FoxM1表達(dá)可提高Hep-2細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性,其機(jī)制可能與FoxM1下調(diào)后
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