凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死病防治中草藥的篩選.pdf

1、凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）是世界三大養(yǎng)殖蝦類品種之一，近年來養(yǎng)殖速度的過快增長造成一系列疾病的暴發(fā)，其中急性肝胰腺壞死?。ˋcute Hepatopancreas Necrosis Disease, AHPND）是近年來危害最為嚴(yán)重的對蝦疾病，目前還沒有行之有效的措施防治AHPND，成為制約養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素。本研究針對養(yǎng)殖凡納濱對蝦AHPND主要致病菌進(jìn)行有效抑菌中草藥的篩選，并對篩選出的復(fù)方中草藥對凡納

2、濱對蝦的安全性，免疫性能等進(jìn)行研究，以期為研發(fā)專用中草藥、防控AHPND和實(shí)現(xiàn)對蝦健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)和參考。
　　本研究選用抑菌圈法和改良微量二倍稀釋法測定了24種廣譜抑菌中草藥對凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死病六種重要致病菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)、Vibrio.sp.Ex-25、麥?zhǔn)匣【?Vib

3、rio metschnikovii)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的體外抑菌效果。結(jié)果顯示，地榆、訶子、黃連和烏梅四味單方中草藥的綜合抑菌效果最好，他們的平均抑菌濃度(MIC)分別為<6.38 mg/ml、7.29 mg/ml、11.98 mg/ml、7.68 mg/ml，平均殺菌濃度(MBC)分別為>25 mg/ml、19.27 mg/ml、>25 mg/ml、16.15 mg/ml。將這四味單方中草藥按照正交

4、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計組成16種復(fù)方，進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明復(fù)方抑菌圈和MIC、MBC值均顯著優(yōu)于單方，平均抑菌圈直徑最大達(dá)到22.08 mm，平均MIC最低達(dá)到2.67 mg/ml，平均MBC最低為6.90 mg/ml。通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HD-4復(fù)方中草藥組的抑菌效果最顯著，最佳質(zhì)量配比為地榆：訶子：黃連：烏梅=1:4:4:4。將不同劑量復(fù)方中草藥HD-4與飼料粘合，復(fù)方中草藥HD-4所占比例從40000mg/Kg～639851 mg/Kg等

5、劑量比設(shè)計8種不同劑量的藥餌飼料，投喂凡納濱對蝦進(jìn)行口服安全性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，復(fù)方中草藥 HD-4對凡納濱對蝦120 h的半數(shù)致死濃度 LD50為（138537.17±4881.93）mg/Kg，根據(jù)毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)判斷為復(fù)方中草藥 HD-4是無毒的。實(shí)驗(yàn)前后對各組存活凡納濱對蝦體重進(jìn)行測量，發(fā)現(xiàn)各組增重情況整體呈現(xiàn)先高后低的趨勢，前5組增重比較顯著，組間差異不顯著(P＞0.05)，120 h內(nèi)增重率在20％～30%之間，與6、7、8組差

6、異顯著(P＜0.05)；后3組增重幅度明顯減緩，尤其是第8組，120 h的增重率不足5%，體重幾乎為增長。將復(fù)方中草藥HD-4以0.5%、1%、2%的比例添加到對蝦飼料中，空白對照組投喂基礎(chǔ)飼料，陽性對照組投喂1%的酵母細(xì)胞壁多糖，投喂30天測定凡納濱對蝦血清中的酸性磷酸酶（Acid phosphatase,ACP）、堿性磷酸酶（Alkalinephosphatase,AKP）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,

7、SOD）以及溶菌酶（Lysozyme,LSZ）的變化，分析30d的體重變化以及研究中草藥對凡納濱對蝦組織結(jié)構(gòu)的影響，最后進(jìn)行人工感染副溶血弧菌實(shí)驗(yàn)，分析免疫保護(hù)率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)2%中草藥投喂組在實(shí)驗(yàn)15天和20天時AKP活性均顯著高于空白組(P＜0.05)，1%中草藥組在第20天時也顯著高于空白組(P＜0.05)；1%中草藥組在10天和15天時ACP活性均顯著高于空白組(P＜0.05)，2%中草藥組在實(shí)驗(yàn)到10天時達(dá)到峰值，與空白組差異顯著

8、(P＜0.05)；三個劑量中草藥組對SOD和LSZ酶在實(shí)驗(yàn)期間沒有產(chǎn)生明顯的變化。隨著中草藥添加量的增加，凡納濱對蝦的相對增重率和特定生長率也伴隨著增加，其中生長狀況最好的是2%中草藥組，增重率達(dá)到(69.71±0.09)%，特定生長率達(dá)到(13.3±2.1)%。采用二次回歸曲線獲得中草藥添加劑量為2.39%時增重率最高。人工感染副溶血弧菌后測定7 d的存活數(shù)量，發(fā)現(xiàn)0.5%、1%、2%三個中草藥組均呈現(xiàn)一定的免疫保護(hù)作用，免疫保護(hù)率分