HBV致肝細(xì)胞凋亡及肝癌形成的分子機(jī)制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染所致急性或暴發(fā)性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是危及全世界人民健康的重要原因之一。流行病學(xué)資料顯示，全世界目前有20多億HBV病毒感染者，其中3.5億以上患者為慢性感染；慢性感染者中約有40﹪進(jìn)展為肝細(xì)胞癌，發(fā)生率是正常人群的100～200倍。HBV感染對人類健康造成極大的危害，是全世界、尤其是我國亟需解決的重大社

2、會問題和科學(xué)問題。 不同的個體在感染HBV后，大部分會清除病毒而痊愈；其他人可以發(fā)生暴發(fā)性肝炎、急性肝炎、無癥狀攜帶狀態(tài)、慢性肝炎、肝硬化、肝癌等不同狀態(tài)的轉(zhuǎn)歸類型。研究者試圖建立各種細(xì)胞模型和動物模型來模擬人體感染HBV后的各種不同攜帶狀態(tài)，并利用這些模型進(jìn)行相關(guān)研究。其中細(xì)胞模型的建立和應(yīng)用已經(jīng)比較成熟，并被廣泛使用。而建立理想的HBV感染動物模型是深入研究HBV所致不同轉(zhuǎn)歸的分子機(jī)制及篩選有效的抗HBV感染藥物必不可少的研

3、究領(lǐng)域。為此，本課題設(shè)計建立了HBV感染的急性小鼠模型，與HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的耐受模型以及HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝癌形成的天然模型組成一系列HBV不同攜帶狀態(tài)的動物模型，系統(tǒng)研究HBV相關(guān)肝炎和肝癌發(fā)生的分子機(jī)制，篩選可阻斷疾病進(jìn)展的關(guān)鍵分子。 HBV感染所致肝細(xì)胞凋亡不僅是乙型肝炎患者肝細(xì)胞損傷、肝功能損害的重要分子機(jī)制之一，而且在HBV感染者不同的預(yù)后、轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮著非常重要的作用。已有研究表明，TNF-α、FasL等凋亡誘導(dǎo)分子在H

4、BV感染所致肝細(xì)胞損傷中發(fā)揮重要作用。腫瘤壞死因子凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor-necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligarld，TRAIL)是于1995年被克隆和命名的腫瘤壞死因子家族成員，TRAIL可特異性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞或者病毒感染細(xì)胞凋亡，而對正常組織細(xì)胞沒有毒性。研究發(fā)現(xiàn)，許多因素可改變細(xì)胞對TRAIL誘導(dǎo)凋亡的敏感性，主要包括病毒、病毒編碼蛋白、放射線、某些藥物等。本課題結(jié)合前期體

5、外實驗研究結(jié)果，在國內(nèi)外率先開展了有關(guān)HBV上調(diào)TRAIL誘導(dǎo)凋亡機(jī)制的動物實驗研究，在體內(nèi)觀察HBV感染對TRAIL誘導(dǎo)凋亡敏感性的影響，篩選在TRAIL誘導(dǎo)凋亡通路中的關(guān)鍵分子以及可以有效阻斷凋亡通路的關(guān)鍵位點，并利用RNA干擾技術(shù)或相應(yīng)分子的阻斷劑從反向證實關(guān)鍵分子和關(guān)鍵位點的作用。利用可溶性DR5阻斷TRAIL的作用，觀察對于小鼠急性月十炎肝細(xì)胞凋亡的影響。 HBV轉(zhuǎn)基因小鼠(transgenic mouse)在20個月內(nèi)100

6、﹪自然成瘤，能客觀模擬HBV攜帶狀態(tài)發(fā)展成肝癌的全過程，并作為肝癌形成過程中各因素動態(tài)變化研究的理想模型。本課題利用基因芯片技術(shù)動態(tài)研究HBv相關(guān)肝癌形成全過程不同時段的肝組織基因表達(dá)譜差異；利用蛋白質(zhì)二維電泳、肽質(zhì)量指紋圖譜等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)初步篩查不同時段HBV轉(zhuǎn)基因鼠與對照組小鼠肝組織差異表達(dá)蛋白。結(jié)合基因芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)等生物信息學(xué)研究結(jié)果，從中篩選出HBV相關(guān)肝癌形成過程中的關(guān)鍵基因和蛋白，對其表達(dá)特點、功能和作用機(jī)制進(jìn)行深入研