STAT3在胃癌腹膜種植轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)理研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩131頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:胃癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是其發(fā)生和演進(jìn)過(guò)程中最危險(xiǎn)階段。隨著人們對(duì)胃癌轉(zhuǎn)移規(guī)律的深入了解,并由此開(kāi)展胃癌擴(kuò)大性淋巴結(jié)清掃術(shù)、聯(lián)合臟器切除術(shù)以來(lái),術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性復(fù)發(fā)和局部復(fù)發(fā)率有了較大程度的降低。但胃癌術(shù)后因腹膜遭癌細(xì)胞種植而復(fù)發(fā)的嚴(yán)重性卻日漸突出,并成為治療中最大障礙之一。文獻(xiàn)報(bào)道在胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的類型中,腹膜種植約占50%,為導(dǎo)致多數(shù)患者死亡的主要原因,目前其發(fā)生機(jī)制尚不明確,且缺乏行之有效的防治手段。JAK-STAT(Janus kin

2、ase-slgnal transducer andactivator of transcription)是近來(lái)頗受關(guān)注的一條信號(hào)傳導(dǎo)通路。研究發(fā)現(xiàn)STAT3的異?;罨c乳腺癌、前列腺癌以及肺癌等多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),腫瘤細(xì)胞可能通過(guò)活化的STAT3信號(hào)影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程,該信號(hào)傳導(dǎo)途徑與胃癌的相關(guān)性是最近為人們所認(rèn)識(shí)的,但該信號(hào)途徑是否也影響到胃癌腹膜種植這一關(guān)鍵性病理過(guò)程,又是通過(guò)何種方式調(diào)控哪些下游信號(hào)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞出現(xiàn)侵

3、襲轉(zhuǎn)移表型,其具體機(jī)制目前尚不清楚。為此,本課題擬首先觀察胃癌患者腹水或腹腔沖洗液中細(xì)胞STAT3表達(dá)及其與胃癌臨床病理參數(shù)及手術(shù)方式的關(guān)系,隨后將STAT3誘餌寡核苷酸(decoyoligonucleotide)經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染胃腺癌細(xì)胞株MKN45,特異性抑制胞核內(nèi)活化的p-STAT3蛋白,觀察其阻抑效應(yīng);并最終建立胃癌裸鼠腹膜種植模型,觀察胃癌細(xì)胞腹膜種植能力及腹膜種植轉(zhuǎn)移過(guò)程相關(guān)調(diào)控因子的變化情況,由此力圖揭示STAT3信號(hào)在胃

4、癌腹膜種植過(guò)程的作用方式及機(jī)理,為胃癌腹膜種植轉(zhuǎn)移防治提供新思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:(1)收集66例胃癌患者腹水或者腹腔沖洗液及12例胃良性疾病患者的腹腔沖洗液標(biāo)本,應(yīng)用腹腔沖洗細(xì)胞學(xué)檢查其中的游離癌細(xì)胞,應(yīng)用巢式RT-PCR方法檢測(cè)腹腔沖洗液中CEAmRNA和STAT3 mRNA表達(dá),系統(tǒng)分析并比較CEAmRNA、STAT3 mRNA表達(dá)與漿膜受侵、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胃癌臨床病理分期(TNM)、病理分化類型等病理因素以及采取的手術(shù)方

5、式的相關(guān)性;(2)將特異性的STAT3 Decoy ODN轉(zhuǎn)染胃腺癌MKN45細(xì)胞并予以鑒定,采用凝膠阻滯電泳(EMSA)和Western blot方法觀察轉(zhuǎn)染前后MKN45細(xì)胞中STAT3的DNA結(jié)合活性和磷酸化STAT3蛋白表達(dá)情況,明確STAT3受抑程度;(3)建立人胃癌細(xì)胞裸鼠腹膜移植模型,觀察STAT3 Decoy ODN轉(zhuǎn)染對(duì)胃癌細(xì)胞裸鼠腹膜種植轉(zhuǎn)移能力的影響;同時(shí)觀察轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞在生長(zhǎng)活力、粘附特性和體侵襲能力方面的改變

6、情況;并應(yīng)用流式細(xì)胞法、免疫組化方法檢測(cè)各組細(xì)胞間E-cadherin、ICAM-1、CD44v6、MMP-2和MMP-9等蛋白表達(dá)的差異。 結(jié)果:(1)PLc檢測(cè)陽(yáng)性率為31.8%,巢式RT-PCR檢測(cè)CEA mRNA和STAT3 mRNA陽(yáng)性率分別為48.48%和43.94%。CEA mRNA及STAT3 mRNA的陽(yáng)性檢出率與PLC相比較有顯著性差異(P=0.000)。胃癌患者腹腔沖洗液CEA mRNA和STAT3 mRN

7、A表達(dá)與腫瘤分化程度(P<0.05)、浸潤(rùn)深度(P<0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.01)和TNM分期有關(guān)(P<0.05),而與腫瘤的大小無(wú)關(guān)(P>0.01);腹腔沖洗液中胃癌細(xì)胞STAT3 mRNA的表達(dá)與CEA mRNA表達(dá)呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)(r=0.999,P<0.001)。比較開(kāi)腹組與腔鏡手術(shù)組標(biāo)本CEA mRNA和STAT3 mRNA表達(dá)無(wú)顯著性差異(P<0.05)。(2)STAT3 Decoy ODN轉(zhuǎn)染MKN45細(xì)胞后,細(xì)胞

8、生長(zhǎng)受到明顯地抑制,抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性;轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期分布中,G<,0>/G<,1>期比例增高,而S期和G<,2>/M期比例降低,細(xì)胞的增殖指數(shù)亦明顯降低(P<0.05)。胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染STAT3:Decoy ODN后,胞核內(nèi)活化形態(tài)的p-STAT3蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。而STAT3的DNA結(jié)合能力與對(duì)照組相比有明顯的差別。(3)建立各轉(zhuǎn)染組胃癌細(xì)胞的裸鼠腹膜轉(zhuǎn)移模型,STAT3 Decoy ODN轉(zhuǎn)染組與

9、對(duì)照組裸鼠比較,腹水產(chǎn)生時(shí)間、腹水量均有顯著性差異(P<0.05);兩組的腹膜種植瘤最大直徑、最大重量和種植瘤數(shù)目相比,亦均有顯著性差異(P<0.05),Decoy ODN轉(zhuǎn)染組腫瘤抑制率為42%;兩組裸鼠的:荷瘤生存時(shí)間、生存率、生命延長(zhǎng)率相比有顯著差異(P<0.01或P<0.05);種植瘤細(xì)胞周期分布情況:STAT3 Decoy ODN組與對(duì)照組細(xì)胞比較,G<,0>/G<,1>期比例增高,而s期和G<,2>/M期比例降低,細(xì)胞的增殖

10、指數(shù)降低。轉(zhuǎn)染Decoy ODN后的胃癌MKN45細(xì)胞體外移行和侵襲能力均有不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。轉(zhuǎn)染。Decoy ODN后的胃癌細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)均顯著高于對(duì)照組細(xì)胞中的相應(yīng)值(P<0.05),ICAM-1、CD44v6、MMP-2和MMP-9表達(dá)均顯著低于對(duì)照組細(xì)胞中的相應(yīng)值(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論:①STAT3與胃癌腹膜種植行為關(guān)系密切,其表達(dá)水平可作為判斷胃癌侵襲轉(zhuǎn)移、術(shù)后

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論