LIF在胃癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其激活Stat3信號途徑的分子機(jī)制.pdf

1、背景和目的胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在各種腫瘤中居于第四位，死亡率高居第二位。這與其生長速度快并且具有極強(qiáng)的局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。盡管胃癌早期診斷和治療方法的不斷進(jìn)步使患者的預(yù)后得到了一定程度的改善，但晚期胃癌的生存率仍然很低。因此，胃癌的早期預(yù)防顯得尤為重要。 目前，胃癌的病因仍未完全明了，但普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為：胃癌的發(fā)生是一個多階段，多因子參與的復(fù)雜過程。在這一過程中，多種轉(zhuǎn)錄因子參與其中并受到激活

2、，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子蛋白家族成員Stat3(Signal transducer and activator of thetranscription 3)就是其中之一。作為一類潛在的胞漿轉(zhuǎn)錄因子，Stat3可將細(xì)胞因子及生長因子攜帶的細(xì)胞外刺激信號傳遞入細(xì)胞核內(nèi)。業(yè)已得到的許多研究結(jié)果表明，Stat3在血液系統(tǒng)惡性腫瘤和包括胃癌在內(nèi)的多種實(shí)體腫瘤中均可被激活，這提示Stat3可能在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中具有其特定的作用。LIF(Leukem

3、iainhibitorfactor，白血病抑制因子)，作為IL-6樣細(xì)胞因子超家族的重要成員之一，能夠活化Star3并使之發(fā)生核易位而啟動下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。LIF/Stat3信號途徑調(diào)控著大量與細(xì)胞生長、分化、凋亡及血管生成有關(guān)的基因的表達(dá)，這其中包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和存活素(Survivin)。大量研究證實(shí)，包括胃癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中普遍存在著伴隨

4、Stat3激活狀態(tài)下的VEGF和Survivin表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象。然而，在一系列實(shí)體腫瘤的研究中，關(guān)于LIF表達(dá)狀況的研究還十分少見，而將LIF/Stat3作為一個完整的信號通路進(jìn)行研究更鮮有報(bào)道。因此，在本研究中，我們試圖探究胃癌中LIF、Star3、VEGF和Survivin的表達(dá)情況，分析LIF的異常表達(dá)對于Stat3信號通路的激活作用以及二者之間的關(guān)系，并借此探討胃癌發(fā)生發(fā)展過程中可能存在的潛在分子機(jī)制。 材料與方法胃癌組

5、織標(biāo)本選自大連醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所(遼寧省高校癌癥基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)建立的胃癌組織庫。胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS、HGC27購于美國標(biāo)準(zhǔn)菌庫(American Type Culture Collection，ATCC)；MGC803、BGC823從北京腫瘤研究所引進(jìn)。胃癌組織按Lauren分型分為腸型和彌漫型兩個亞型，并以癌旁相對正常粘膜(慢性萎縮性胃炎和腸上皮化生)作為對照，基于石蠟組織微陣列技術(shù)進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測。利用Western Blo

6、t和RT-PCR的方法平行檢測LIF、Stat3、VEGF和Survivin在不同胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。最后，采用Mann-Whitney U，X<'2>檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性分析對上述指標(biāo)的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，p<0.01表明具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1．與癌旁相對正常胃粘膜比較，胃癌中LIF、VEGF和Survivin的表達(dá)及Stat3核易位現(xiàn)象均明顯增強(qiáng)，二者之間存在明顯差異(p=0.000)。 2．在65例胃組

7、織點(diǎn)中，45例(45/65，69.23﹪)表現(xiàn)為Stat3核易位陽性，43例(43/65，66.15﹪)表現(xiàn)為LIF染色陽性。此外，在45例核Stat3陽性的組織點(diǎn)中，有40例(40/45，88.89﹪)同時(shí)表現(xiàn)為LIF染色陽性。對于LIF和Stat3表達(dá)陽性率的分析可發(fā)現(xiàn)二者之間存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X<'2>=33.762，p<0.01)。 3．胃癌組織中VEGF的表達(dá)上調(diào)和Stat3核易位具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)正相關(guān)(r=0.5

8、02，p<0.01)，對于Survivin的檢測也發(fā)現(xiàn)了相同的現(xiàn)象(r=0.533，p<0.01)。 4．四個胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS、HGC27、MGC803和BGC823的RT-PCR和WesternBlot分析結(jié)果顯示：AGS中LIF的mRNA水平明顯高于其余三個細(xì)胞系，而Stat3，VEGF和Survivin的mRNA表達(dá)水平并無明顯差異。上述四個指標(biāo)的蛋白表達(dá)在四個細(xì)胞系中也未發(fā)現(xiàn)明顯的差異。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胃癌組織及細(xì)胞系中

9、Stat3的激活及其引起的下游靶基因VEGF和Survivin表達(dá)上調(diào)與LIF的高表達(dá)可能具有內(nèi)在的關(guān)聯(lián)。伴隨LIF的高表達(dá)，細(xì)胞漿內(nèi)的Stat3發(fā)生活化并轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核而引起VEGF和Survivin的表達(dá)明顯升高。因此，我們的結(jié)果在證實(shí)胃癌中普遍存在Stat3活化現(xiàn)象的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)胃癌中頻發(fā)的LIF表達(dá)及其與Stat3的核易位以及VEGF和Survivin的表達(dá)之間存在某種內(nèi)在聯(lián)系，這導(dǎo)致了LIF攜帶的細(xì)胞信號通過Stat3介導(dǎo)而進(jìn)入