成骨細胞膜片的構建及其生物學研究.pdf

1、目的：探討利用大鼠成骨細胞在體外構建具有一定機械強度細胞膜片的可行性；探討構建膜片對成骨細胞生物學活性和成骨性的影響。為無支架細胞膜片骨組織工程研究提供一定實驗基礎。
　　方法：原代培養(yǎng)大鼠成骨細胞，通過形態(tài)學觀察，堿性磷酸酶染色，茜素紅染色進行成骨細胞鑒定；在50μL/ml抗壞血酸的培養(yǎng)基中，高密度連續(xù)培養(yǎng)，構建成骨細胞膜片；倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡進行形態(tài)學觀察檢測；成骨細胞接種后，實驗組培養(yǎng)基中添加50μL/ml抗壞血

2、酸，對照組常規(guī)培養(yǎng)，分別于1周，2周，3周行M TT檢測，組織學厚度測量分析，堿性磷酸酶(ALP)活性測定，Real-time PCR檢測成骨相關基因COL、OCN表達情況，對實驗數據進行統(tǒng)計學分析，a=0.05,p<0.05,具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：原代培養(yǎng)的成骨細胞形態(tài)觀察、堿性磷酸酶、茜素紅染色鑒定符合成骨細胞特性。通過連續(xù)培養(yǎng)后機械刮取的方法獲得成骨細胞膜片。膜片測量厚度結果顯示：第1周至第2周是膜片厚度增加最顯著的時

3、間段，平均厚度可達38.4±2.1μm。MTT結果顯示：實驗組培養(yǎng)1周，2周后，細胞增殖率明顯高于對照組，且細胞增殖率隨時間的增加而上升。3周后，實驗組細胞增值率低于對照組。ALP結果顯示：實驗組ALP明顯高于對照組，第2周相對于第1周酶活性降低?；驒z測結果提示：實驗組成骨細胞內COL、OC基因表達高于對照組，實驗組間
　　結論：抗壞血酸誘導，高密度接種，連續(xù)培養(yǎng)可以構建出成骨細胞膜片；抗壞酸酸促進細胞增殖，促進堿性磷酸酶分泌，