大鼠成骨細胞膜片在不同鈦表面的骨再生效應(yīng)研究.pdf

1、目的：
　　初步探討大鼠成骨細胞膜片在不同鈦表面的骨再生效應(yīng)。
　　方法：
　　原代培養(yǎng)大鼠成骨細胞，通過形態(tài)學(xué)、HE染色、堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定成骨細胞；在不同表面處理的鈦片上構(gòu)建大鼠成骨細胞膜片，實驗分組：噴砂酸蝕組、陽極氧化組和光滑組，分別于第一周和第二周，采用物理刮取法獲取成骨細胞膜片；通過倒置相差顯微鏡、掃描電鏡對細胞膜片進行觀察；HE染色測量細胞膜片的厚度；MTT法測量細胞膜片的細胞密度；微量酶標(biāo)法

2、檢測細胞膜片堿性磷酸酶（ALP）活性；采用實時熒光定量PCR檢測成骨細胞膜片Runx相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2（Runx2）mRNA、骨涎蛋白（BSP）mRNA的表達，并對數(shù)據(jù)進行相應(yīng)的統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　倒置相差顯微鏡下觀察原代培養(yǎng)細胞，細胞符合成骨細胞形態(tài)學(xué)特征，HE染色、堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定結(jié)果符合成骨細胞特性。光滑組成骨細胞膜片的厚度測量：與第一周相比，第二周細胞膜片厚度明顯增加（P<0.05），提示細胞膜片

3、在鈦表面增殖生長。MTT法檢測：噴砂酸蝕組和陽極氧化組的細胞增殖率明顯高于光滑組，細胞增殖率隨時間增加而上調(diào)；噴砂-酸蝕組與陽極氧化組之間無差異。堿性磷酸酶（ALP）檢測：各時間點噴砂酸蝕組和陽極氧化組堿性磷酸酶活性明顯高于光滑組（P<0.05）；各組第二周較第一周堿性磷酸酶活性降低(P<0.05)；噴砂酸蝕組與陽極氧化組間無明顯差異。實時熒光定量PCR檢測：組間比較時，相對于光滑組，陽極氧化組Runx2 mRNA的表達量明顯上調(diào)(第一

4、周、第二周P<0.05),噴砂酸蝕組Runx2 mRNA的表達量比光滑組增加最明顯（第一周P<0.05，第二周P<0.05）。第一周和第二周噴砂酸蝕組和陽極氧化組BSP mRNA表達量均高于光滑組,兩周均具有統(tǒng)計學(xué)意義，其中第二周噴砂酸蝕組BSP mRNA表達量比光滑組顯著增加（P<0.05）。噴砂酸蝕組與陽極氧化組間無差異。組內(nèi)比較時，各組細胞膜片第二周Runx2 mRNA的表達量比第一周明顯下調(diào)（P<0.05）；與第一周比較，第二周