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文檔簡介
1、本文研究目的:建立兔髖臼軟骨急性沖擊傷的實驗模型,觀察分析髖臼軟骨損傷后的病理學及超微結構演變,比較研究MRI診斷髖臼軟骨沖擊傷的方法和價值,為髖臼軟骨沖擊性損傷防治尋求理想的診斷方法并奠定理論基礎。 方法:整個實驗分為三部分進行: 第一部分:髖臼軟骨沖擊性損傷動物模型的制備與病理研究 選用新西蘭大白兔50只,隨機分配到24h、2周、6周、3月、6月時間組。每組10只中,5動物用600牛頓力沖擊,5只動物用300
2、牛頓力沖擊,隨機選取一側后肢為實驗組,另一側為對照組。在各觀察時間點分期取材行大體觀察,HE染色光鏡下觀察軟骨損傷的病理變化,透射電鏡觀察軟骨損傷的超微結構變化,采用流式細胞儀進行軟骨細胞正常、凋亡、死亡數定量,熒光顯微鏡進行分布定位等方法觀察髖臼軟骨損傷整個病理變化過程。 第二部分:髖臼軟骨沖擊傷與MRI參數優(yōu)化的多序列成像 使用目前臨床常用的7種MRI成像序列,對髖臼軟骨損傷模型進行掃描,參數優(yōu)化,以病理作對照,計算
3、不同序列對診斷軟骨損傷的敏感性和特異性,比較研究各序列的優(yōu)缺點及其應用價值。 第三部分:髖臼軟骨損傷后細胞合成功能的變化研究 采用放射自顯影技術,在取材前兩天行關節(jié)內注入氚標的脯氨酸,利用同位素標記示蹤,觀察殘存軟骨細胞合成軟骨基質功能的改變。 結果: 600牛頓力組24h后鏡下見有軟骨細胞壞死;2周后出現軟骨細胞增生;6周后受損軟骨殘存細胞變小,排列紊亂,細胞趨向于成纖維細胞樣變,也可出現殘存的軟骨細胞
4、增生;3月后受損的軟骨著色淺淡,殘存的軟骨細胞較少,其中有細胞簇集性增生,在受損軟骨區(qū)可出現雙潮標;6月后受損軟骨細胞大部分死亡,受損軟骨旁軟骨表面纖維化,軟骨開始脫落。受損軟骨殘存細胞簇集性增生更明顯,可出現由于增生細胞全部死亡后留下的空腔。損傷軟骨旁出現軟骨細胞排列紊亂,表層軟骨細胞減少,深層軟骨細胞叢集性增生及軟骨吸收鈣化。 300牛頓力組24h后鏡下未見壞死;2~6周后出現軟骨細胞增生;3~6月后受損軟骨厚度變厚,細胞層
5、數增加,排列大致呈柱狀,軟骨陷窩清楚,有較多增生的同源細胞群,細胞核大,呈圓形,周圍基質染色均勻整齊,表層細胞數量較少,部分細胞核固縮。 造模24h和2周后,600牛頓及300牛頓組受損軟骨在透射電鏡下可見軟骨細胞凋亡,600牛頓組還可見到壞死軟骨細胞;6周---6月后,軟骨細胞以凋亡為主。 熒光顯微鏡下觀察300牛頓組可見死亡軟骨細胞位于表層,600牛頓組熒光顯微鏡下死亡軟骨細胞位于全層。 流式細胞儀檢測軟骨細
6、胞凋亡對照側正常的關節(jié)軟骨細胞經膠原酶消化后,有87±10%的細胞正常,10±6%的細胞死亡,5±3%的軟骨細胞凋亡。 300牛頓組軟骨損傷24h后死亡細胞為¨±6%,凋亡細胞為7±3%,正常細胞為78±10%;2周后死亡細胞為11±7%,凋亡細胞為20±3%,正常細胞為68±¨%;6周后死亡細胞為10&7%,凋亡細胞為35±3%,正常細胞為53±11%;3月后死亡細胞為lO±6%,凋亡細胞為32±5%,正常細胞為56±9%;6
7、月后死亡細胞為10±5%,凋亡細胞為31±6%,正常細胞為57±9%。 600牛頓組軟骨損傷24h后死亡細胞增多為20±9%,凋亡細胞為7±4%,正常細胞為70±¨%;2周后死亡細胞為14±9%,凋亡細胞為35±9%,正常細胞為50±12%;6周后死亡細胞為12±9%,凋亡細胞為68±8%,正常細胞為18±9%;3月后死亡細胞為12±8%,凋亡細胞為60&9%,正常細胞為26±7%:6月后死亡細胞為¨±7%,凋亡細胞為59±¨%
8、,正常細胞為25±8%。 損傷24h后600牛頓組以死亡細胞為主,600牛頓組死亡細胞比300牛頓組多(經t檢驗分析兩者差異顯著P<0.01);損傷2周后,兩組損傷部細胞凋亡均增多,但600牛頓細胞凋亡多(經t檢驗分析兩者差異顯著P<0.01);損傷6周后,兩組凋亡細胞比損傷2周時均增多(經t檢驗分析兩者差異顯著P<0.01);損傷后3月及6月600牛頓組均有軟骨細胞凋亡增多,但較6周時少。 7個序列中T2/T/FSE診
9、斷關節(jié)軟骨病理改變最佳,T;/T/FSE及PD/T/FSE序列也有一定診斷作用,7個序列均可明確診斷骨挫傷。 600牛頓組殘存的軟骨細胞24h到2周后不能吸收脯氨酸合成膠原蛋白;6周后,損傷處部分細胞膠原蛋白合成功能恢復,3月到6月后可見殘存的細胞大量簇集性增生。 300牛頓組殘存的軟骨細胞24h后部分吸收脯氨酸合成膠原蛋白,2周到6月逐漸增多,6周后可見簇集性增生。 結論: 1.600牛頓力可立即導致細
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