葛根等中藥材高效液相色譜指紋圖譜的研究.pdf

1、HPLC色譜指紋圖譜的建立，主要是最佳色譜條件的確定，第一要考慮色譜柱，一般選擇C18反相柱。針對生物堿類可選用離子交換柱，對于多糖則選用凝膠柱。第二是洗脫方式，可先用等度洗脫方式進(jìn)行嘗試。在等度洗脫不能奏效情況下，再采用梯度洗脫方式，梯度洗脫的重現(xiàn)性上有一定要求，可以通過固定儀器(低壓混合或高壓混合)、色譜柱、簡化溶劑系統(tǒng)，盡量簡化梯度條件、恒定測定溫度等方式得到有效控制，可利用系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)和方法學(xué)來規(guī)范操作過程。第三是檢測器，HP

2、LC法建立指紋圖譜可據(jù)物質(zhì)情況選擇紫外(UV)、二極管陣列檢測器(DAD)、蒸發(fā)光散射或折光等方式。采用DAD可進(jìn)行測定波長的優(yōu)化選擇，檢測峰純度和對化學(xué)成分的溯源等工作。 本論文采用正交設(shè)計(jì)法，以葛根素和葛根總黃酮為指標(biāo)，對提取工藝進(jìn)行系統(tǒng)綜合評價(jià)，并對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，最后確定最佳工藝條件是加9倍量30％乙醇提取3次，每次1h。提高了原料的利用率(提取率)，提取的黃酮比較完全，有利于指紋圖譜的研究。通過對影響大孔樹脂吸附

3、及解吸葛根總黃酮各種因素的系統(tǒng)研究，最后確定了大孔樹脂分離的最佳工藝為：樹脂型號為日本三菱公司的SP70型大孔樹脂，藥液濃度為0.5g/mL(相當(dāng)于原生藥)，藥液pH為5～6，吸附速率為2BV/h時(shí)吸附效果最好，上柱量為60倍樹脂床體積。洗脫最佳工藝為5倍樹脂床體積的70％乙醇以2BV/h的速率洗脫效果最佳。經(jīng)SP70處理后的葛根總黃酮可達(dá)80％以上，這種料液或做成的浸膏可應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)際。通過12 批次野葛藥材樣品各色譜峰的相對保留時(shí)間

4、和峰面積百分比的比較和分析，對共有指紋峰進(jìn)行了確定，并據(jù)此成功建立了野葛藥材的HPLC 指紋圖譜。經(jīng)與不同產(chǎn)地野葛樣品和粉葛樣品的HPLC 圖譜的比較，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)獲得的色譜指紋圖譜在不同產(chǎn)地野葛樣品中具有極大的相似性，并能據(jù)此與粉葛品種進(jìn)行有效的區(qū)分；從而可以有效反映野葛藥材成分特征的唯一性和同一物種個(gè)體間的相似性，可以作為野葛藥材專屬性的指紋圖譜。 在柴胡的指紋圖譜研究中，能較好地柴胡的種類進(jìn)行鑒定以及質(zhì)量評價(jià)。以北柴胡的

5、特征指紋和相對峰面積均值為比較標(biāo)準(zhǔn)，由于北柴胡與柴胡屬藥材在總差異率方面有明顯的不同，北柴胡有18個(gè)不同產(chǎn)地的樣品，但它們的總差異率在0.367～0.865之間。除北柴胡外，在柴胡屬植物的6個(gè)樣品中有5個(gè)的總差異率超過此值，占樣品總數(shù)的83％。因此特征指紋的總差異率可作為考察的首要條件，區(qū)分與鑒定北柴胡與柴胡屬中其他品種藥材。 柴胡屬植物中有21號(阿爾泰柴胡)、24號(瀘西柴胡)、2號(北柴胡)、20號(銀州柴胡)4個(gè)樣品，它

6、們的總差異率均低于0.600。其中2號經(jīng)鑒定是北柴胡，屬正常情況，21號和24號兩者的特征指紋檢出率均為70％，該值低于擬定的特征指紋檢出率界線76％，即可排除在北柴胡品種之外。20號樣品的的特征指紋檢出率為80％，高于上述界線，它的10強(qiáng)峰有9個(gè)都被收入特征指紋峰之列。以上各項(xiàng)參數(shù)均說明20號樣品與北柴胡極相似，從色譜指紋譜的角度而言，20號銀州柴胡有可能被納入藥用。當(dāng)然，要達(dá)到此目的尚需做大量的藥理、藥效、毒理等實(shí)驗(yàn)，以保證臨床用藥