心鈉素在增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變玻璃體和增殖膜表達的初步研究.pdf

1、目的：研究增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy，PDR)患者玻璃體和視網(wǎng)膜前增殖膜(epiretinal membrane,ERM)中心鈉素(atrialnatriuretic peptide，ANP)的表達水平，確定ANP參與PDR的形成過程，補充ERM研究的實驗方法。 方法：第一部分：收集10例PDR患者的ERM為實驗組，5例PVR患者的ERM為對照組，用免疫組化染色方

2、法觀察兩組ERM的增殖特點及ANP在ERM的表達情況，用Mann.Whitney U檢驗比較實驗組和對照組ANP表達率的差異。第二部分：收集30例PDR患者玻璃體為實驗組，30例非PDR患者的玻璃體為對照組，用放射免疫分析方法(Radioimmunoassay，RIA)測定玻璃體中ANP的濃度。用Bradford法測定玻璃體中的蛋白濃度。用Mann-WhitneyU方法分析兩組間ANP濃度、蛋白濃度以及ANP和蛋白濃度比值的差異。第三部

3、分：收集15例PDR患者的ERM為實驗組，15例非PDR患者的ERM為對照組，用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reserve transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)測定ERM中ANPmRNA和內(nèi)參對照3-磷酸甘油脫氫酶(glyceraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH)mRNA的表達水平(以ANP和GAPDHmRNA 的電泳條帶峰值之比表示)，用

4、Mann-Whitney U方法分析兩組間比值的差異。 結(jié)果：第一部分：蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色顯示實驗組和對照組ERM標本中均可見大量細胞成分，有含色素顆粒的視網(wǎng)膜色素上皮(retinalpigmental epithelium，RPE)細胞、小圓核細胞和橢圓核細胞，此外實驗組ERM還含有大量血管成分。免疫組化染色顯示：實驗組的ERM主要成分為膠質(zhì)細胞、RPE細胞和血管組織，8例(80％)E

5、RMANP有陽性表達，表達ANP的細胞有膠質(zhì)細胞、RPE細胞和血管內(nèi)皮細胞，對照組的ERM主要成分為膠質(zhì)細胞和RPE細胞，1例(20％)ERM ANP有陽性表達，表達ANP的細胞中有膠質(zhì)細胞和RPE細胞。實驗組和對照組的ANP平均表達率分別為32.1％(范圍0～52.0％，中位數(shù)33.5％)和1.6％(范圍0～8.0％，中位數(shù)0％)，兩者差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；實驗組和對照組GFAP和CK的平均表達率分別為56.4％(范圍5

6、2.1～60.3％，中位數(shù)56.5％)，21.5％(范圍18.3～24.6％，中位數(shù)23.3％)；58.2％(范圍55.1～60.9％，中位數(shù)58.4％)和22.7％(范圍19.7～25.6％，中位數(shù)22.2％)，兩者差異無統(tǒng)計學意義(P>O.05)。第二部分：實驗組玻璃體ANP平均濃度為(68.23±16.65)pg/ml(范圍40.1 1～99.56pg/ml，中位數(shù)66.30pg/m1)，對照組玻璃體ANP平均濃度為(38.45±

7、7.62)pg/ml(范圍30.10～57.32pg/ml，中位數(shù)36.86pg/ml)，兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；實驗組平均蛋白濃度為(810.53±188.60)ug/ml(范圍401.33～1361.70ug/ml，中位數(shù)786.58ug/ml)；對照組玻璃體平均蛋白濃度為(596.17±161.80)ug/ml(范圍375.69～1136.37ug/ml，中位數(shù)570.04ug/ml)，兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P<

8、0.01)；實驗組平均ANP/蛋白值為(0.09±0.02)(范圍0.05～0.16，中位數(shù)0.09)；對照組ANP/蛋白值為(0.07±0.02)(范圍0.04～0.14，中位數(shù)0.06)，兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。第三部分：實驗組ERM ANPmRNA電泳條帶平均峰值為188.5±53.6(范圍109.3～255.0，中位數(shù)213.5)；GAPDHmRNA平均峰值為237.931.1(范圍162.2～255.0，中位數(shù)

9、254.0)，兩者平均比值為0.8-+0.3(范圍0.51～1.4，中位數(shù)0.8)；對照組ERM ANPmRNA電泳條帶平均峰值為100.4±12.0(范圍79.2～122.0，中位數(shù)98.3)；GAPDmRNA平均峰值為231.6-+36.3(范圍113.8～255.0，中位數(shù)246.8)兩者平均比值為0.4±0.1(范圍0.31～0.82，中位數(shù)0.4)；兩組比值差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 結(jié)論：免疫組化研究、半定