小檗堿對糖尿病大鼠胃腸神經(jīng)功能損傷的作用機制研究.pdf

1、目的：探討小檗堿改善糖尿病早期大鼠胃腸神經(jīng)功能紊亂的作用機制。
　　方法：將SD大鼠隨機分為正常對照組，糖尿病模型組，模型灌胃給藥組。禁食12小時后，鏈脲佐菌素（STZ）以65mg·kg-1腹腔注射給藥，72小時后尾靜脈取血監(jiān)測血糖值，超過16.70mmol·L-1視為誘導糖尿病大鼠模型成功。模型灌胃給藥組造模成功2周后，每天灌胃給予小檗堿（200mg·kg-1），持續(xù)2周。采用HE染色法觀察大鼠胃平滑肌的形態(tài)學改變；試劑盒檢測膽

2、堿能和氮能神經(jīng)相關(guān)化學指標的變化，以及小檗堿對其的影響。運用電場刺激誘發(fā)神經(jīng)源性反應及離體器官肌張力分析的方法，觀察小檗堿對大鼠胃平滑肌神經(jīng)功能的影響，并探討可能的作用機制。
　　結(jié)果：⑴與同期正常組大鼠相比，糖尿病模型組、小檗堿灌胃給藥組大鼠的體重明顯低于正常組大鼠體重（P<0.01）；與糖尿病模型組大鼠相比，小檗堿灌胃給藥組大鼠的體重無明顯差異（P>0.05）。與同期正常組大鼠相比，糖尿病模型組、小檗堿灌胃給藥組大鼠的血糖值明

3、顯升高（P<0.01）；與糖尿病模型組大鼠相比，小檗堿灌胃給藥組大鼠的血糖值無明顯差異（P>0.05）。⑵各組染色清晰可見，細胞核與嗜堿性顆粒被染成藍紫色，胞漿等組織呈桃紅色。神經(jīng)元胞體呈圓形或橢圓形或不規(guī)則形，集中分布于肌間神經(jīng)叢，細胞核清晰可見，核仁明顯。胞質(zhì)內(nèi)散亂的分布著嗜堿性細顆粒，即尼氏體。以正常對照組HE染色結(jié)果為參照，各組細胞核均勻分布在胃底平滑肌內(nèi)，核仁清晰可見；糖尿病模型組的神經(jīng)元細胞的胞體呈現(xiàn)空泡樣病變，經(jīng)小檗堿灌胃

4、治療后空泡樣病變數(shù)量減少，然而各組胃底平滑肌中的神經(jīng)元數(shù)量并未發(fā)生改變。⑶以蛋白標準品的濃度和各濃度所測定的OD值為橫、縱坐標繪制蛋白標準曲線，求得蛋白標準曲線的方程為y=0.92x+0.042，R2=0.99。⑷與正常組相比，糖尿病模型組、小檗堿灌胃給藥組大鼠胃底組織中的tNOS活力無顯著性差異（P>0.05）。與正常組相比，糖尿病模型組大鼠胃底組織中的nNOS含量明顯下降（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，小檗堿灌胃給藥組大鼠胃底

5、組織中的nNOS含量無明顯差異（P>0.05）。⑸與正常組相比，糖尿病模型組大鼠胃底組織中的ChAT活力明顯上升（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，小檗堿灌胃給藥組大鼠胃底組織中的ChAT活力顯著性降低（P<0.01）。與正常組相比，糖尿病模型組大鼠胃底組織中的AChE活力明顯下降（P<0.05）；與糖尿病模型組相比，小檗堿灌胃給藥組大鼠胃底組織中的AChE活力無明顯差異（P>0.05）。與正常組相比，糖尿病模型組大鼠胃底組織中的 A

6、Ch含量明顯增加（P<0.01）；與糖尿病模型組相比，小檗堿灌胃給藥組大鼠胃底組織中的ACh含量無明顯差異（P>0.05）。⑹L-arg100μmol·L-1浴槽內(nèi)給藥明顯降低電場刺激誘發(fā)大鼠胃底環(huán)行肌收縮反應（ P<0.01），并引發(fā)收縮幅度的紊亂；L-NAME10,100μmol·L-1浴槽內(nèi)給藥可引起大鼠胃底環(huán)行肌的收縮反應顯著性升高（P<0.01）。0.30μmol·L-1卡巴膽堿預收縮標本后進行電場刺激，新斯的明0.01μmo

7、l·L-1浴槽內(nèi)給藥明顯抑制2Hz、4Hz、10Hz電場刺激引起的大鼠胃底環(huán)行肌的舒張反應（抑制率分別為13.8％，11.2%，14.2%，P<0.01）。⑺1,10μmol·L-1小檗堿、10,100μmol·L-1 L-NAME和0.003,0.01μmol·L-1新斯的明浴槽內(nèi)給藥，均濃度依賴性增加電場刺激誘發(fā)大鼠胃底環(huán)行肌收縮反應（P<0.05, P<0.01）。在10μmol·L-1 L-NAME的存在下，10μmol·L-1

8、小檗堿可進一步增強電場刺激誘發(fā)大鼠胃底環(huán)行肌的收縮反應（P<0.05）。⑻1μmol·L-1苯氨氯地平和10μmol·L-1西尼地平浴槽內(nèi)給藥均顯著性抑制電場刺激引起的大鼠胃底環(huán)行肌收縮反應（抑制率分別為43.9%和44.7%，P<0.01），并且完全取消小檗堿對收縮反應的增強作用。1μmol·L-1苯氨氯地平明顯抑制L-NAME、新斯的明引起的收縮反應的增強（P<0.05，P<0.01）。⑼0.01-1mmol·L-1小檗堿對胃底組織

9、中 tNOS活力無明顯影響（P>0.05）；10,100mmol·L-1 L-NAME對胃底組織的tNOS活力明顯降低（P<0.05）。0.01,0.10mmol·L-1小檗堿濃度組對胃底組織中的AChE活力無明顯影響（P>0.05）；1mmol·L-1小檗堿體使胃底組織中的AChE活力顯著性降低（P<0.01）；0.1,1μmol·L-1新斯的明使胃底組織中 AChE活力明顯降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：①在STZ誘導的糖尿