血必凈對膿毒癥大鼠單核細(xì)胞組織因子及凝血功能的影響.pdf

1、目的：1.觀察細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）對大鼠外周血單核細(xì)胞組織因子（tissue factor，TF）和蛋白酶激活受體（protease activated receptors，PARs）的影響。2.觀察血必凈注射液對LPS刺激的大鼠外周血單核細(xì)胞分泌TF、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α及表達(dá)PAR-1、PAR-

2、2的影響。3.觀察血必凈注射液對膿毒癥大鼠外周血單核細(xì)胞PAR-1、PAR-2和血漿TF、IL-6、TNF-α的影響。4.觀察血必凈注射液對膿毒癥大鼠凝血功能及血小板（platelet，PLT）的影響。 方法：1.分離培養(yǎng)雄性Wistar大鼠外周血單核細(xì)胞，用LPS（1μg/ml）刺激，與活化蛋白C（activated protein C，APC）作對比，以終濃度為10mg/ml的血必凈注射液干預(yù)不同時間（12、24、48及72

3、h）后，用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunoadsorbent assay，ELISA）檢測細(xì)胞上清液TF、IL-6、TNF-α的含量，用流式細(xì)胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測細(xì)胞表面PAR-1、PAR-2的表達(dá)。2.將LPS（1μg/ml）刺激的大鼠外周血單核細(xì)胞以1、10及100mg/ml不同終濃度的血必凈注射液干預(yù)，培養(yǎng)24h后用ELISA檢測細(xì)胞上清液TF、IL-6、TNF-α的含量，用F

4、CM檢測細(xì)胞表面PAR-1、PAR-2的表達(dá)。3.將104只大鼠按隨機數(shù)字表分為4組：對照組、假手術(shù)組、CLP組和血必凈治療組，分別于手術(shù)后12、24、48及72h經(jīng)腹主動脈取血，分離單核細(xì)胞，用FCM檢測細(xì)胞表面PAR-1、PAR-2的表達(dá)，提取血漿，用ELISA檢測TF、IL-6、TNF-α的含量，用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real time-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測外周血單個核細(xì)胞T

5、F、IL-6mRNA的表達(dá)，并檢測凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、活化的部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）及PLT的變化。 結(jié)果：1.體外實驗中，LPS刺激的大鼠外周血單核細(xì)胞在刺激后24、48及72hPAR-1上調(diào)（P<0.01），在刺激后各時間點PAR-2也上調(diào)（P<0.05或P<0.01

6、），細(xì)胞上清中TF、IL-6、TNF-α的含量在刺激后各時間點均增加（P<0.01）。LPS+APC組較LPS組在干預(yù)后24、48及72h PAR-1下調(diào)（P<0.01），在干預(yù)后24及48h PAR-2上調(diào)（P<0.01），在干預(yù)后各時間點TF、IL-6、TNF-α含量均減少（P<0.05或P<0.01）。LPS+血必凈組較LPS組在干預(yù)后24、48及72h PAR-1下調(diào)（P<0.01），在干預(yù)后各時間點PAR-2上調(diào)（P<0.01

7、），在干預(yù)后各時間點TF、IL-6、TNF-α含量均減少（P<0.05或P<0.01）。2.體外實驗中，1、10及100mg/ml不同終濃度的血必凈注射液干預(yù)組較LPS組PAR-1下調(diào)（P<0.01），細(xì)胞上清液TF、IL-6、TNF-α下降（P<0.05或P<0.01），以10mg/ml干預(yù)組最明顯，僅10mg/ml干預(yù)組較LPS組PAR-2上調(diào)（P<0.01）。3.與對照組、假手術(shù)組相比CLP組大鼠外周血單核細(xì)胞PAR-1在手術(shù)后4

8、8及72h上調(diào)（P<0.05或P<0.01），PAR-2在手術(shù)后各時間點均上調(diào)（P<0.05或P<0.01）；TF在手術(shù)后24、48及72h增加（P<0.05或P<0.01），IL-6及TNF-α在手術(shù)后各時間點均增加（P<0.05或P<0.01），外周血單個核細(xì)胞TF、IL-6 mRNA的表達(dá)在手術(shù)后12、24及48h增加（P<0.05或P<0.01）；PT在手術(shù)后24、48及72h縮短（P<0.05或P<0.01），APTT在手術(shù)后

9、12及48h延長（P<0.01），F(xiàn)IB在手術(shù)后12、24及48h降低（P<0.05或P<0.01），PLT在手術(shù)后12及24h降低（P<0.05或P<0.01）。與CLP組相比，血必凈組PAR-1在手術(shù)后12及24h下調(diào)（P<0.05或P<0.01），PAR-2在手術(shù)后各時間點均上調(diào)（P<0.05或P<0.01）；TF在手術(shù)后24、48及72h下降（P<0.05或P<0.01），IL-6在手術(shù)后24及48h下降（P<0.01），TNF

10、-α在手術(shù)后各時間點也下降（P<0.05或P<0.01），外周血單個核細(xì)胞TF mRNA在手術(shù)后12、24及48h下降（P<0.05或P<0.01），IL-6 mRNA在手術(shù)后各時間點也下降（P<0.05或P<0.01）；PT在手術(shù)后24及48h延長（P<0.05或P<0.01），APTT在手術(shù)后48h縮短（P<0.05），F(xiàn)IB在手術(shù)后12、24及48h增加（P<0.01），PLT在手術(shù)后24及48h增加（P<0.05或P<0.01）