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文檔簡介
1、目的:觀察膿毒癥大鼠急性肺損傷模型肺臟形態(tài)學、病理學改變及核因子kappa B(NF-κB)的表達、血漿血栓調節(jié)蛋白(TM)濃度和血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)濃度,并觀察應用血必凈注射液后上述指標的變化,從蛋白C(PC)途徑、內皮細胞損傷、炎癥因子的角度探討膿毒癥的發(fā)生機制及血必凈注射液對膿毒癥肺損傷的保護作用。
方法:采用盲腸結扎穿孔術(CLP),制備大鼠膿毒癥模型。選用健康Spragne-Dawley(SD)大鼠
2、144只,體重在200~230g之間,隨機分為4組:空白對照組(A組)24只、假手術組(B組)24只、膿毒癥組(C組)48只、血必凈治療組(D組)48只。各組動物按術后處死時間點6、24、48、72小時各分為4個亞組,A組和B組的每個亞組6只大鼠,C組和D組的每個亞組12只。D組分別按CLP后0、12、24、36、48、60小時經尾靜脈注射血必凈注射液4ml/kg。C組和B組于相應時間點經尾靜脈注射相應量生理鹽水。各組大鼠自CLP術畢開
3、始計時,于相應時間點將動物麻醉后,經腹主動脈采血測定血漿TM濃度、血清TNF-α濃度,取右肺下葉行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察形態(tài)學改變,免疫組化檢測NF-κB的表達。
結果:①大鼠一般情況的觀察:B組大鼠均存活,蘇醒早,一般狀況逐漸好轉,進食水及大便正常;剖腹未見惡臭、腸管壞死、腹腔水腫等表現(xiàn)。C組大鼠均有嚴重的膿毒癥表現(xiàn):蘇醒延遲、逐漸出現(xiàn)精神萎靡、豎毛、活動減少、不再扎堆取暖,進食量減少、腹瀉及呼吸頻率加快等表現(xiàn),2
4、4小時后出現(xiàn)死亡;剖腹有惡臭,可見血性慘液、腸管水腫粘連、盲腸腫脹壞死。D組大鼠與C組相比臨床表現(xiàn)有所減輕,死亡數有所減少。②病理觀察:A組大鼠肺呈均勻粉紅色;光鏡下組織結構完整清晰,肺泡壁完整,肺泡腔無炎細胞浸潤,偶有少許紅細胞。B組大鼠與A組無明顯差異。C組大鼠雙肺腫脹,呈暗紅色,肺表面可見散在出血點及出血斑,切面含血量多,可有實變區(qū)或萎陷區(qū);光鏡下早期肺泡壁毛細血管擴張、瘀血、炎性細胞浸潤,肺水腫、彌漫肺出血及肺泡腔塌陷,部分透明
5、膜形成,后期可見肺泡塌陷明顯,肺大皰形成,病變24小時達頂峰,其后無減輕趨勢。D組大鼠較C病理損傷輕且有減輕趨勢。③血漿TM濃度:A組與B組血漿TM濃度較穩(wěn)定,兩者差異無統(tǒng)計學意義,p>0.05。C組大鼠CLP后6小時血漿TM濃度開始升高,并逐漸上升,至72小時仍無下降趨勢,與A、B組比較差異有統(tǒng)計學意義,p<0.01。D組大鼠CLP后6小時血漿TM濃度開始升高,但比同時間點C組濃度低,以后逐漸降低,仍比同時間點B組濃度高,D組與C組及
6、A組、B組差別均有統(tǒng)計學意義,p<0.01。④血清TNF-α濃度:A組與B組血清TNF-α濃度較穩(wěn)定,兩者差異無統(tǒng)計學意義。C組血清TNF-α濃度于CLP后6小時開始逐漸升高,至72小時無下降趨勢,與A組及B組相比,差異均有統(tǒng)計學意義,p<0.05。D組血清TNF-α濃度在各時間點較C組均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義,p<0.05。D組血清各時間點TNF-α濃度均較A組及B組升高,差異有統(tǒng)計學意義,p<0.05。⑤肺組織NF-κB表達:A
7、、B組均可見散在的NF-κB陽性細胞;C組于CLP后6、24、48、72小時均顯著增強,在支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞及血管內皮細胞的胞質內有表達,與A、B組比較有顯著差異,p<0.05;D組CLP后6小時亦出現(xiàn)表達,24、48、72小時表達顯著低于C組,但仍明顯高于A、B組,差異均有統(tǒng)計學意義,p<0.05。
結論:①CLP法能夠成功復制大鼠膿毒癥肺損傷模型。②血必凈注射液可以明顯降低TNF-α和TM水平,減少肺組織NF
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