B淋巴細(xì)胞刺激因子（BlyS）誘導(dǎo)的抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文B淋巴細(xì)胞刺激因子（BlyS）誘導(dǎo)的抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：傅春華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：魏于全20040420四川大學(xué)博士學(xué)位論文鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系CT26和Lewis肺癌細(xì)胞系LL2，通過(guò)Zeosin抗性篩選獲得單克隆腫瘤細(xì)胞株。提取細(xì)胞總RNA做半定量RTPCR，鑒定出高表達(dá)msBlyS的穩(wěn)定細(xì)胞克隆，進(jìn)一步做westernblot鑒定和生物活性測(cè)定。(3)將高分泌msBlyS的腫瘤細(xì)胞(msBl

2、yStumor)接種到實(shí)驗(yàn)小鼠皮下，觀察基因修飾后的腫瘤細(xì)胞自身的成瘤性觀察未成瘤免疫小鼠再次接種野生型腫瘤細(xì)胞后，能否產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)通過(guò)EL工SA免疫印跡，免疫熒光等手段檢測(cè)有無(wú)抗腫瘤自身抗體的產(chǎn)生淋巴細(xì)胞阻斷實(shí)驗(yàn)過(guò)繼免疫實(shí)驗(yàn)等探討抗腫瘤作用的機(jī)理。結(jié)果:(1)測(cè)得的msBlyScDNA序列與基因文庫(kù)中報(bào)道序列完全相同，插入相位正確，未改變目的基因的閱讀框架。(2)轉(zhuǎn)染后得到8個(gè)CT26單克隆抗性腫瘤細(xì)胞株，其中有5個(gè)經(jīng)RTPCR

3、擴(kuò)增出msBlyS目的條帶9個(gè)LL2單克隆抗性腫瘤細(xì)胞株，其中有7個(gè)經(jīng)RTPCR擴(kuò)增出msBlyS目的條帶。Westernblot顯示該克隆株細(xì)胞裂解物可與抗msBlyS的抗體結(jié)合，在雜交膜上形成一條與預(yù)期蛋白分子量一致的條帶。生物活性測(cè)定顯示細(xì)胞分泌上清可共刺激體外培養(yǎng)的B淋巴細(xì)胞增殖，(3)msBlyS修飾的腫瘤細(xì)胞成瘤性顯著降低，尤其是msBlyS修飾的小鼠LewisA$癌細(xì)胞(msBlySLL2)荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)明顯減緩，生存