豬B淋巴細胞刺激因子及其融合蛋白的優(yōu)化表達、純化與生物活性研究.pdf

1、B 淋巴細胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNFfam1ly，BAFF）是腫瘤壞死因子(TNF）超家族的第十七位成員，有膜結(jié)合型和可溶型兩種形式。BAFF 不僅參與調(diào)節(jié)B 細胞增殖、分化及抗體的產(chǎn)生，而且還參與T 細胞的活化和應答過程?，F(xiàn)已證明BAFF 存在有三個受體：B 細胞成熟蛋白(B cell maturation protein，BCMA)、跨膜激活與CAML作用因

2、子(Transmembraneactivator and CAML-interactor，TACI)和BAFF 受體(BAFF receptor，BAFF-R)。
　　 B 淋巴細胞刺激因子是屬于TNF 家族的，對B 細胞分化和存活起著重要作用的一種細胞因子。豬BAFF（pBAFF）的開放讀碼框由288個氨基酸組成。豬的BAFF在氨基酸水平上與人的BAFF的相似性為88％。在大腸桿菌中表到的豬可溶性BAFF的分子量大約為19kD

3、a。通過鎳柱純化得到的豬BAFF在體外可以促進豬的B 細胞的存活或增殖。這個結(jié)果表明豬的BAFF在豬的B 細胞的存活或增殖上起著重要的作用。在大腸桿菌中的優(yōu)化表達，增加了目的蛋白可靠的生物利用，為進一步的研究奠定了基礎。
　　 將豬B 淋巴細胞刺激因子和增強型綠色熒光蛋白通過（Gly4Ser）2linker 相連接，在大腸桿菌BL21（DE3）中誘導表達融合蛋白EGFP-psBAFF；并對該蛋白進行Ni2+-IDA 親和層析柱純