缺氧誘導(dǎo)因子-1的表達(dá)對(duì)毛囊細(xì)胞及毛囊生長(zhǎng)的影響.pdf

1、毛囊是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的皮膚附屬器官，始終處于生長(zhǎng)期、退行期和休止期的周期性循環(huán)中，許多激素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子及其受體等相互作用，形成網(wǎng)絡(luò)，共同調(diào)控著毛囊的周期性循環(huán)和毛發(fā)生長(zhǎng)<'[1]>。毛囊生長(zhǎng)的關(guān)鍵部位(毛球部)深埋于真皮深層，皮膚表面的局部用藥很難滲透到毛球部，而成纖維細(xì)胞緊鄰表皮下方，并包裹在毛囊周圍。如果將目的基因通過(guò)脂質(zhì)體直接導(dǎo)入成纖維細(xì)胞則相對(duì)較容易，導(dǎo)入后在毛囊周圍的成纖維細(xì)胞可以表達(dá)和分泌某些關(guān)鍵因子，從而發(fā)揮促毛發(fā)生

2、長(zhǎng)的作用，達(dá)到治療毛發(fā)疾病的目的，為毛發(fā)疾病的治療提供新的治療方法。本研究借助陽(yáng)離子脂質(zhì)體，將外源性的人HIF-1α基因轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞，探討轉(zhuǎn)基因所誘導(dǎo)表達(dá)的HIF-1對(duì)體外培養(yǎng)的人毛囊及毛囊成纖維細(xì)胞和真皮鞘細(xì)胞活性的影響，并檢測(cè)其下游細(xì)胞因子的表達(dá)情況。研究結(jié)果表明： 1.重組質(zhì)粒pcDNA3.0-HIF-1α經(jīng)測(cè)序，與Genebank公布的人HIF-1α序列完全一致。 2.轉(zhuǎn)染后36h，利用顯微鏡觀察可見(jiàn)轉(zhuǎn)染HIF

3、-1α pcDNA3.0組的成纖維細(xì)胞的胞漿及部分胞核表達(dá)有特異性的HIF-1α，而轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.0組和單純轉(zhuǎn)染液組的成纖維細(xì)胞內(nèi)未表達(dá)特異性的HIF-1α。 3.ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pcDNA3.0-HIF-1α組的細(xì)胞上清液中VEGF的水平明顯高于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.0組和單純轉(zhuǎn)染液組(P<0.01)。 4.MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，加入轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pcDNA3.0-HIF-1α組的細(xì)胞上清液

4、的成纖維細(xì)胞活性明顯高于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.0組和單純轉(zhuǎn)染液組(P<0.01)。 5.在體外培養(yǎng)的人毛囊中加入細(xì)胞上清液后，8天內(nèi)A組毛囊的平均毛發(fā)生長(zhǎng)長(zhǎng)度明顯高于B組和C組(P<0.01)，而B(niǎo)組和C組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。毛囊形態(tài)學(xué)觀察，A組毛囊仍處于生長(zhǎng)期，而B(niǎo)組和C組毛囊已經(jīng)發(fā)生退行性改變。 6.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染篩選成功后，利用Western blotting可見(jiàn)轉(zhuǎn)染HIF-1αpcDNA3.0的成纖維細(xì)

5、胞中有HIF-1蛋白的表達(dá)，而對(duì)照組的成纖維細(xì)胞內(nèi)未表達(dá)特異性的HIF-1。 7.ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pcDNA3.0-HIF-1α組的細(xì)胞上清液中VEGF的水平明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。 8.通過(guò)RT-PCR可檢測(cè)到轉(zhuǎn)染組bFGF的表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.01)。 9.加入轉(zhuǎn)染pcDNA-HIF1α組上清的成纖維細(xì)胞及毛囊真皮鞘細(xì)胞活性均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。 文中借助陽(yáng)