64層MSCT評價(jià)冠狀動脈非鈣化斑塊和旁路移植血管的臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：（1）為開展腎移植的移植免疫研究，建立大鼠同種異體腎移植模型。（2）監(jiān)測血清Th1/Th2細(xì)胞因子水平及其在移植腎組織中的mRNA表達(dá)在大鼠同種異體腎移植中的動態(tài)變化，研究其預(yù)測排斥反應(yīng)與免疫耐受的價(jià)值。（3）監(jiān)測CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞（regulatoryT cells，TR）在大鼠同種異體腎移植外周血中的動態(tài)變化，研究其在預(yù)測排斥反應(yīng)和免疫耐受中的價(jià)值。（4）應(yīng)用器官移植中最常用的免疫抑制劑環(huán)孢素A（Cyclospori

2、n，CsA）聯(lián)合供體骨髓細(xì)胞（donor bone marrow cells，DBMC）輸注誘導(dǎo)大鼠同種異體腎移植免疫耐受，以探討其誘導(dǎo)免疫耐受的機(jī)理并為臨床腎移植工作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：（1）Wistar大鼠為供體，SD大鼠為受體。采用左側(cè)腎移植法，供體腎帶瓣動脈與受體腹主動脈端—側(cè)吻合，供體左腎靜脈上方下腔靜脈斷端與受體下腔靜脈端—側(cè)吻合，供體輸尿管帶膀胱瓣與受體膀胱吻合。（2）ELISA測定血清中細(xì)胞因子IL—2、IFN

3、—γ、IL—4、IL—10的表達(dá)水平；實(shí)時(shí)定量RT—PCR（Real—time quantitative reverse transcription PCR）監(jiān)測IL—2、IFN—γ、IL—4、IL—10 mRNA在移植腎組織中的表達(dá)。（3）流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）監(jiān)測CD4+CD25+TR細(xì)胞在大鼠同種異體腎移植外周血中的動態(tài)變化。（4）應(yīng)用CsA聯(lián)合DBMC輸注誘導(dǎo)大鼠同種異體腎移植免疫耐受：觀察生存時(shí)間（

4、d）；應(yīng)用全自動生化分析儀檢測移植腎受體血清肌酐（Cr）的動態(tài)變化；ELISA測定血清中細(xì)胞因子IL—2、IFN—γ、IL—4、IL—10的水平；實(shí)時(shí)定量RT—PCR監(jiān)測IL—2、IFN—γ、IL—4、IL—10 mRNA在移植腎組織中的表達(dá)（術(shù)后7d）；流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測CD4+CD25+TR細(xì)胞在外周血中的變化；單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）了解免疫耐受的特異性；移植腎病理檢查，判斷排斥反應(yīng)的程度。 結(jié)果：（1）建立了一種穩(wěn)定、

5、實(shí)用的改良性大鼠同種異體腎移植動物模型。腎靜脈吻合時(shí)間平均（18±1.5）min，動脈吻合時(shí)間平均（15±1.0）min，總手術(shù)時(shí)間平均（135±22）min。熱缺血時(shí)間<5s，冷缺血時(shí)間40～45min。（2）Th1細(xì)胞因子IL—2、INF—γ在大鼠同種異體腎移植中，無論在血清中的表達(dá)水平或在移植腎組織中的mRNA表達(dá)水平與同系對照組及CsA組比較均顯著升高，而與此對應(yīng)Th2細(xì)胞因子IL—4、IL—10顯著降低。（3）CD4+CD25

6、+TR細(xì)胞在大鼠同種異體腎移植急性排斥反應(yīng)過程中明顯低于同系對照組；而CsA組CD4+CD25+ TR細(xì)胞明顯高于同系對照組。（4）CsA聯(lián)合供體骨髓細(xì)胞可成功誘導(dǎo)大鼠同種異體腎移植免疫耐受。CsA聯(lián)合供體骨髓細(xì)胞組與單純CsA組比較生存時(shí)間明顯延長；血清Th1細(xì)胞因子（IL—2、IFN—γ）及其在移植腎中的mRNA表達(dá)下降、血清Th2細(xì)胞因子（IL—4、IL—10）及其在移植腎中的mRNA表達(dá)升高，即Th1細(xì)胞因子向Th2細(xì)胞因子偏移

7、；外周血CD4+CD25+TR細(xì)胞比例升高；MLR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CsA聯(lián)合DBMC組與單純CsA組比較，受體僅對供體特異性免疫反應(yīng)降低，而對第三品系仍存在高免疫反應(yīng)性；移植腎病理提示CsA聯(lián)合DBMC組與單純CsA組比較，排斥反應(yīng)降低。 結(jié)論：（1）通過改良方法建立的大鼠同種異體腎移植模型是一種成功率較高、手術(shù)方法容易掌握的動物模型。（2）動態(tài)監(jiān)測Th1/Th2細(xì)胞因子在外周血清中的濃度或其mRNA在移植腎組織中的表達(dá)水平可預(yù)測和

8、判斷急性排斥反應(yīng)的發(fā)生，Th1細(xì)胞因子水平升高提示受體與移植腎之間存在高免疫反應(yīng)狀態(tài)，有發(fā)生急性排斥反應(yīng)的可能；Th2細(xì)胞因子水平升高提示受體與移植腎之間存在低免疫反應(yīng)或耐受狀態(tài)。（3）CD4+CD25+ TR細(xì)胞在抑制腎臟移植排斥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，動態(tài)監(jiān)測外周血中CD4+CD25+TR細(xì)胞的水平可預(yù)測和判斷急性排斥反應(yīng)的發(fā)生，了解腎臟移植后受體和移植腎之間的免疫反應(yīng)程度或耐受狀態(tài)。（4）CsA聯(lián)合供體骨髓細(xì)胞可成功誘導(dǎo)大鼠同種異體腎