冠狀動脈旁路移植術患者骨髓和循環(huán)祖細胞的臨床研究.pdf

1、目的：缺血性心臟病是目前世界范圍內主要的致死和致殘疾病,常合并其他全身性疾病。骨髓和循環(huán)祖細胞在缺血性心臟病患者細胞治療和再血管化治療中起重要作用。本文主要研究：冠心病患者圍術期危險因素與骨髓單個核細胞(bone marrow mononuclear cdls,BMMNCs)及骨髓祖細胞的關系；冠心病圍術期危險因素與循環(huán)祖細胞的關系；冠狀動脈旁路移植術對循環(huán)祖細胞的影響。
　　 方法：⑴經胸骨骨穿采集44例患者骨髓,應用Fico

2、n淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離BMMNCs,計數并應用臺盼藍拒染法檢測其活性,普通顯微鏡行形態(tài)學觀察,用DAPI標記行熒光觀察；應用流式細胞儀分析檢測CD34+、CD133+和CD34+CD133+細胞的含量；應用集落形成試驗和細胞遷移試驗觀察細胞功能。⑵前瞻性選擇單純行冠狀動脈旁路移植術患者51名,在術中采集患者骨髓,于術前、術后第1天晨、術后第3天及術后第5天獲得患者外周靜脈血,應用流式細胞儀檢測循環(huán)CD34+CD45dim細胞

3、、CD133+CD45dim細胞和CD34+CD133+CD45dim細胞水平,應用集落形成試驗和遷移試驗離體評價骨髓和循環(huán)祖細胞的功能；應用Elisa試劑盒檢測血漿G-CSF、SDF-1α和VEGF水平。
　　 結果：①術中經胸骨抽取20ml胸骨骨髓可獲到10-89×106個BMMNCs,臺盼藍染色拒染率95％以上,形態(tài)為均一大小的單個核細胞,等量的骨髓血獲得的BMMNcs的量與患者年齡之間存在負相關關系(n=44,r=-0.

4、788,p=0.001)；流式細胞儀檢測CD34+細胞占0.94±0.39％,CD133+細胞占0.46±0.28％,CD34+CD133+細胞占0.53+0.26％,糖尿病患者骨髓CD34+和CD133+細胞水平明顯較非糖尿病患者為低；高齡、女性和心功能較差與骨髓祖細胞集落形成能力降低有關,Euroscore評分可作為骨髓祖細胞集落形成能力降低的預測變量；CD34+細胞水平與骨髓單個核細胞的遷移能力存在明顯的正相關。②術前外周血循環(huán)中

5、每10000個白細胞中含CD34+CD45dim細胞1.51±1.26,CD133+CD45dim細胞1.16±0.85,CD34+CD133+CD45dim細胞1.86±1.59.男性和吸煙患者CD34+CD45dim細胞水平較高,心功能較差的患者CD133+CD45dim細胞和CD34+CD133+CD45dim細胞水平較低；隨著年齡增加,循環(huán)祖細胞的集落形成能力下降(r=-0.786,p<0.001),應用他汀類藥物的患者循環(huán)祖細

6、胞的集落形成能力較強{7.48±3.03(33)vs5.50±2.71(18),p=0.025},男性患者或合并外周動脈疾病或冠脈左主干疾病的患者外周血單個核細胞的遷移能力較高。③無論是體外還是非體外冠狀動脈旁路移植術,術后循環(huán)CD34+CD45dim細胞水平及CD133+CD45dim祖細胞水平均升高,并且體外循環(huán)手術后較非體外循環(huán)術后患者循環(huán)祖細胞水平變化大；循環(huán)祖細胞術后的升高伴隨著細胞因子SDF-1α和G-CSF的升高,而骨髓單

7、個核細胞的遷移能力與外周血動員的祖細胞水平之間存在明顯的正相關。
　　 結論：⑴經胸骨應用密度梯度離心法可獲得足夠數量的BMMNCs作為缺血性心臟病治療的供體細胞,年齡、性別、糖尿病、心功能及Euroscore評分與BMMNCs數量和功能有關。⑵循環(huán)祖細胞水平在女性和心功能較差的患者較低,循環(huán)祖細胞的功能隨著年齡的增加而降低,術前應用他汀類藥物增強循環(huán)祖細胞功能。⑶冠狀動脈旁路移植術患者術后循環(huán)祖細胞水平升高,與血漿G-CSF和