介導(dǎo)金葡菌侵襲細(xì)胞的FnBPA蛋白功能肽段的初步研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌(以下簡稱金葡菌)是革蘭染色陽性病原菌，能引起多種疾病。過去研究認(rèn)為金葡菌屬于胞外寄生菌。但近來的研究表明，金葡菌可以侵襲多種非專職吞噬細(xì)胞，F(xiàn)nBP蛋白是介導(dǎo)金葡菌侵襲宿主細(xì)胞的關(guān)鍵表面蛋白。 研究認(rèn)為FnBP蛋白通過與纖連蛋白結(jié)合從而介導(dǎo)細(xì)菌與細(xì)胞的結(jié)合，其中FnBPA與纖連蛋白結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)位于蛋白D結(jié)構(gòu)域，以重復(fù)序列為單位，包括3個(gè)連續(xù)的完整的重復(fù)序列D<,1>、D<,2>、D<,3>和一個(gè)截短的D<,4>

2、序列。由于空間位阻的關(guān)系，如果FnBP僅僅以重復(fù)序列為單位結(jié)合Fn分子，勢必造成實(shí)際結(jié)合位點(diǎn)的減少和D4截短序列功能的冗余。為保證最大限度的生物利用和結(jié)合，我們推測FnBPA D domain中的Fn結(jié)合位點(diǎn)可能并不是以重復(fù)序列為單位的，某些截短的重復(fù)序列或具有結(jié)合功能，或和下一個(gè)重復(fù)序列的一部分組合產(chǎn)生新的結(jié)合位點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的目的是對以上推測進(jìn)行初步驗(yàn)證。 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，我們建立了細(xì)菌侵襲293細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停⑼ㄟ^此模型找到了

3、金葡菌有效侵襲株04018作為實(shí)驗(yàn)用菌株。利用基因工程的方法，克隆了04018菌株的FnBPA蛋白D<,1>區(qū)C端和D<,2>區(qū)N端肽段的基因片段，在大腸桿菌中表達(dá)了GST與該肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)融合蛋白中的目的肽能夠結(jié)合Fn，細(xì)菌侵襲細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)證實(shí)融合蛋白的目的肽能夠抑制金葡菌侵襲293細(xì)胞，蛋白的50％抑制劑量約為20μg/ml，相當(dāng)于2.5μg/ml肽。 通過本課題的研究，我們找到