抗金葡菌工程多肽對燙傷大鼠耐甲氧西林金葡菌感染的相關(guān)研究.pdf

1、[目的] 研究抗金黃色葡萄球菌工程多肽(Pheromonicin-Staphylococcus aureus，Ph-SA)對大鼠深I(lǐng)I°燙傷耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 (methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)感染創(chuàng)面的抗菌活性。<,2> [方法] 選用60只健康SD大鼠，體重220～250克，不分雌雄，隨機分為三組，Ph-SA組、萬古霉素組(簡稱萬古組)、生理鹽水對

2、照組(簡稱對照組)各20只。將其麻醉后，造成深I(lǐng)I°燙傷創(chuàng)面。然后涂抹OD值為0.6的MRSA ATCC BAA-42菌液1ml。涂抹MRSA后1h各組分別給藥1次。Ph-SA組創(chuàng)面均勻涂抹1.35mg／ml的Ph—SA 0.5ml；萬古組創(chuàng)面均勻涂抹1.35mg／ml萬古霉素0.5ml；對照組創(chuàng)面均勻涂抹生理鹽水0.5ml。燙傷后七天內(nèi)觀察大鼠的精神、進食、活動情況，以及創(chuàng)面的變化，分別于燙傷后的ld、3d、5d、7d處死，無菌狀態(tài)下

3、于創(chuàng)面中央取兩塊0.5cm×0.5cm皮膚及皮下組織塊。其中一塊組織勻漿離心取上清液，倍比稀釋后用含苯唑西林6μg／ml的MH選擇培養(yǎng)基涂板菌落計數(shù)。另一塊創(chuàng)面組織，行HE染色觀察創(chuàng)面炎性反應(yīng)及組織壞死等情況，行革蘭氏染色觀察在創(chuàng)面組織中的細菌量。 [結(jié)果] 所有實驗大鼠至實驗結(jié)束無1例死亡,且精神、進食及活動良好。對照組大鼠創(chuàng)面于3d開始有少許滲出，5d創(chuàng)面滲出增多并出現(xiàn)膿性分泌物，7d創(chuàng)面膿性分泌物增多。Ph-SA組及萬古

4、組第ld、3d、5d均未發(fā)現(xiàn)滲出，創(chuàng)面或焦痂干燥，7d創(chuàng)面出現(xiàn)少量滲出。所有實驗大鼠燙傷創(chuàng)面均未發(fā)現(xiàn)明顯紅腫，Ph-SA組大鼠未見局部和全身的過敏反應(yīng)的發(fā)生。菌落計數(shù)顯示傷后各時間點對照組的細菌數(shù)均多于Ph-SA組及萬古組(P<0.05)，Ph-SA組與萬古組之間各時間點細菌數(shù)均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。三個組的細菌數(shù)從傷后ld至7d連續(xù)性逐漸增多(P<0.05)。HE染色顯示傷后ld三組之間炎性反應(yīng)均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，

5、傷后3d、5d、7d對照組的炎癥反應(yīng)均較Ph-SA組及萬古組重(P<0.05)，各時間點Ph-SA組與萬古組均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，三個組的炎癥反應(yīng)從傷后ld至7d連續(xù)性逐漸加重(P<0.05)。革蘭氏染色顯示傷后各時間點對照組的細菌量均多于Ph-SA組及萬古組(P<0.05)，Ph-SA組與萬古組之間各時間點細菌量均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，三個組的細菌量從傷后ld至7d連續(xù)性逐漸增多(P<0.05)。 [結(jié)論]

6、 Ph-sA對耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)引起的燒傷創(chuàng)面感染具有抗菌活性，其抗菌能力與萬古霉素相當。 [目的] 探討Ph-SA對燙傷大鼠金葡菌膿毒癥時IFN-γ和細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子(suppressor of cytokine signaling，SOCS)SCOSl基因表達的影響。 [方法] 將健康SD大鼠制成20％Ⅲ度燙傷模型，隨機分成Ph-SA組、萬古霉素組(萬古組)和生理鹽水對照組(對照組)。

7、燙傷后24h腹腔注射增毒后的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcusaureus，MRSA)1ml，然后三組大鼠分別通過尾靜脈注射0.75mg／m1的Ph-SA、0.75mg／m1萬古霉素和生理鹽水0.1m1。于注射前及注射后0.5，2，6，12，24h處死大鼠，留取肝、肺組織。分別用ELISA方法測定組織中的IFN—γ含量，熒光定量PCR方法測定組織中的SCOSl mRNA的表

8、達量。 [結(jié)果] 燙傷大鼠金葡菌膿毒癥可導致肝臟、肺臟組織中IFN-γ水平顯著增加。肝臟組織IFN-γ于傷后0.5h即開始急劇增加，2h后達到高峰(110.72±7.34 pg／m1)，此后略下降，維持在較高水平。肺臟組織的IFN-γ水平上升較慢，大約6h左右達到高峰。Ph-SA作用后，肝臟工FN-γ水平出現(xiàn)一過性增加，高峰前移至0.5h左右出現(xiàn)(114.04±8.63 pg／m1)，以后逐漸降低到和萬古霉素組水平相當(P>0

9、.05)。肺臟組織的IFN-γ水平在Ph—SA作用后也出現(xiàn)高峰前移至2h出現(xiàn)(146.148±10.7 pg／m1)，大約24h后下降到和萬古霉素組相近的水平(P>0.05)。而萬古霉素組在作用后，IFN-γ水平在各組織、各時間點均較對照組明顯下降(P