Cdk3在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其作用機(jī)制研究.pdf

1、本文探討Cdk3在結(jié)腸癌變過(guò)程中的演變規(guī)律，以及在結(jié)腸癌中的異常表達(dá)，明確Cdk3通過(guò)介導(dǎo)AP-1活性升高促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而參與細(xì)胞癌變的作用機(jī)制。文中明確Cdk3在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，用免疫組織化學(xué)和原位雜交的方法檢測(cè)22例結(jié)腸癌組織、22例結(jié)腸腺瘤組織、24例結(jié)腸息肉組織中的Cdk3蛋白和mRNA的表達(dá)；為探討Cdk3在癌變中的生物學(xué)功能，將H-ras、Cdk3和c-Jun等質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至3T3細(xì)胞，用細(xì)胞平板集落形成實(shí)驗(yàn)研究Cdk3過(guò)

2、表達(dá)促進(jìn)H-ras介導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。探討Cdk3參與癌變可能的分子機(jī)制，將Cdk3、Cdk2和AP-1等質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞，用熒光酶報(bào)道基因分析的方法檢測(cè)AP-1活性，明確Cdk3促進(jìn)AP-1活性升高. 1.免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示，在顯微鏡下Cdk3蛋白在結(jié)腸息肉組織、結(jié)腸腺瘤組織、結(jié)腸癌組織中的表達(dá)呈核-漿型，以胞漿為主。圖象分析結(jié)果顯示：結(jié)腸癌組織中Cdk3蛋白的平均光密度(0.80±0.36)明顯高于結(jié)腸腺瘤組織

3、(0.48±0.22)和結(jié)腸息肉組織(0.25±0.13)(P<0.05)，結(jié)腸腺瘤組織中的平均光密度明顯高于結(jié)腸息肉組織(P<0.05)。 2.mRNA原位雜交表明，在顯微鏡下Cdk3 mRNA在結(jié)腸息肉組織、結(jié)腸腺瘤組織、結(jié)腸癌組織中表達(dá)呈核一漿型，以胞漿為主。圖象分析結(jié)果顯示：結(jié)腸癌組織中Cdk3 mRNA的平均光密度(0.26±0.08)與結(jié)腸腺瘤組織(0.25±0.04)和結(jié)腸息肉組織(0.33±0.07)之間無(wú)顯著性

4、差異(P>0.05)，但是在顯微鏡下觀察，結(jié)腸癌組織中Cdk3 mRNA表達(dá)強(qiáng)于結(jié)腸腺瘤組織和結(jié)腸息肉組織，提示Cdk3在結(jié)腸癌變中可能具有重要作用。 3.在細(xì)胞平板集落形成實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3細(xì)胞平板集落數(shù)(53±12.7)LP,僅轉(zhuǎn)染H-ras(34±14.7)明顯增多(P<0.05)，轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3+c-Jun的細(xì)胞集落數(shù)(115±25.3)在各組中是最高的，轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3+c-Jun-Mu

5、tant的細(xì)胞集落數(shù)(52±8.5)LL轉(zhuǎn)染H-ras+Cdk3+c-Jun明顯減少(P<0.05)。這些結(jié)果表明Cdk3通過(guò)c-Jun促進(jìn)細(xì)胞集落形成。 4.轉(zhuǎn)染Cdk3組AP-1相對(duì)活性(11.87±3.48)與轉(zhuǎn)染Cdk3-DN組(0.99±0.18)、轉(zhuǎn)染Cdk2組(0.97±0.31)和對(duì)照組(1.27±0.35)相比明顯升高(P<0.05)，轉(zhuǎn)染Cdk3+cyclin C組AP-1相對(duì)活性(18.12±2.14)與轉(zhuǎn)