2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一章:結(jié)腸癌組織中RASGRF1的表達(dá)和甲基化檢測(cè)
  目的:
  探討RAS GRF1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)和甲基化情況及其與臨床病理的關(guān)系。
  方法:
  采用免疫組織化學(xué)和甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)結(jié)腸癌組織及其對(duì)應(yīng)的遠(yuǎn)離結(jié)腸癌的正常組織RASGRF1蛋白表達(dá)情況和甲基化狀態(tài),分析RASGRF1蛋白的表達(dá)和啟動(dòng)子甲基化與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。
  結(jié)果:
  1.在結(jié)腸癌組織中RASGRF

2、1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率(36.8%)明顯低于其對(duì)應(yīng)的遠(yuǎn)端正常組織(91.2%),其蛋白表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(P<0.05);與性別、年齡、腫瘤大小和分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)。
  2.在結(jié)腸癌組織中RASGRF1基因甲基化比例(70.6%)明顯高于其對(duì)應(yīng)的遠(yuǎn)端正常組織(17.6%),其甲基化程度與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(P<0.05);與性別、年齡、腫瘤大小和分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)。

3、
  3.RASGRF1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與基因啟動(dòng)子甲基化呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.RASGRF1在結(jié)腸癌中表達(dá)下調(diào),其表達(dá)與該基因啟動(dòng)子甲基化呈負(fù)相關(guān),DNA甲基化可能是結(jié)腸癌RASGRF1表達(dá)下調(diào)的原因之一。
  2.RASGRF1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及甲基化與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān),其表達(dá)下調(diào)和甲基化可能參與結(jié)腸黏膜的惡性轉(zhuǎn)變,在結(jié)腸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起一定的作用。

4、r>  第二章:結(jié)腸癌細(xì)胞中RASGRF1的表達(dá)和甲基化檢測(cè)及其過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型的建立
  目的:
  探討RASGRF1在人結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)和甲基化情況,篩選適合的細(xì)胞株建立體外RASGRF1過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型并對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。
  方法:
  采用RT-PCR、Western Blot和MSP檢測(cè)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29、HCT116、SW480和SW620中RASGRF1mRNA和蛋白的表達(dá)情況及甲基化狀態(tài);利用

5、不同濃度的5-Aza-CdR處理結(jié)腸癌細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)處理前后RASGRF1 mRNA水平的表達(dá)變化;篩選出適合的細(xì)胞株建立體外RASGRF1過(guò)表達(dá)結(jié)腸癌細(xì)胞模型;將RASGRF1過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染篩選出來(lái)的結(jié)腸癌細(xì)胞株,使結(jié)腸癌細(xì)胞高表達(dá)RASGRF1,并運(yùn)用Real-time qPCR和Western Blot進(jìn)行驗(yàn)證。
  結(jié)果:
  1.RASGRF1 mRNA在人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480中表達(dá)最高,HT29、SW6

6、20次之,而在HCT116中表達(dá)最低。
  2.RASGRF1蛋白在人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480中表達(dá)最高,而在HT29、HCT116和SW620中表達(dá)均明顯下調(diào)。
  3.RASGRF1基因啟動(dòng)子在人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29、HCT116、SW480和SW620中均存在不同程度的高甲基化,其中以HCT116甲基化程度最高。
  4.經(jīng)過(guò)5-Aza-CdR處理后,結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116中RASGRF1基因表達(dá)增高。
  

7、5.選擇HCT116細(xì)胞成功建立體外RASGRF1過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型(pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO-RASGRF1)。
  結(jié)論:
  1、RASGRF1mRNA和蛋白的表達(dá)在結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116中均明顯下調(diào),且RASGRF1基因啟動(dòng)子在結(jié)腸癌細(xì)胞株中存在高甲基化;5-Aza-CdR能上調(diào)RASGRF1的表達(dá)。
  2、HCT116細(xì)胞適于構(gòu)建體外RASGRF1過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型。pcDNA3.2/V5/GW

8、/D-TOPO-RASGRF1能有效地轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞,使HCT116細(xì)胞中的RASGRF1高表達(dá)。
  第三章:RASGRF1過(guò)表達(dá)對(duì)HCT116細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的研究
  目的:
  探討RASGRF1過(guò)表達(dá)對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制。
  方法:
  實(shí)驗(yàn)分為兩組,轉(zhuǎn)染pcDNA3.2/V5/GW/D-TOPO-RASGRF1的過(guò)表達(dá)組和轉(zhuǎn)染空載體pcDNA

9、3.2/V5/GW/D-TOPO的空白對(duì)照組。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力;劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力;Western Blot法分析RASGRF1過(guò)表達(dá)對(duì)EMT上皮標(biāo)志物E-cadherin,間質(zhì)標(biāo)志物fibronectin,vimentin蛋白表達(dá)的影響。
  結(jié)果:
  1.M

10、TT結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,過(guò)表達(dá)組可有效抑制HCT116細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖能力(P<0.05)。
  2.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,空白對(duì)照組和過(guò)表達(dá)組HCT116細(xì)胞的早期調(diào)亡率分別為3.68±0.26%和4.18±0.25%;晚期凋亡率分別為23.90±0.38%和24.68±0.82%。過(guò)表達(dá)組與空白對(duì)照組相比,其早期和晚期凋亡率均無(wú)明顯差異(P>0.05)。
  3.Transwe

11、ll細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,過(guò)表達(dá)組HCT116細(xì)胞穿膜數(shù)顯著少于空白對(duì)照組(32.2±2.3 vs.48.9±2.2)(P<0.01)。
  4.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,過(guò)表達(dá)組HCT116細(xì)胞愈合能力明顯減低;Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí),過(guò)表達(dá)組HCT116細(xì)胞穿膜數(shù)顯著少于空白對(duì)照組(41.1±5.3 vs.66.8±5.5)(P<0.01)。
  5.Western Blot結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組

12、比較,過(guò)表達(dá)組E-cadherin蛋白的表達(dá)上調(diào),而fibronectin,vimentin蛋白的表達(dá)下降。
  結(jié)論:
  1.RASGRF1過(guò)表達(dá)可抑制HCT116細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖,降低HCT116細(xì)胞的侵襲遷移能力,而對(duì)HCT116細(xì)胞的凋亡無(wú)明顯影響,RASGRF1可能在調(diào)控結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起關(guān)鍵性作用。
  2.RASGRF1過(guò)表達(dá)可上調(diào)E-cadherin蛋白的表達(dá),抑制fibronectin,vime

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