控制性超促排卵對小鼠子宮內(nèi)膜種植窗期水通道蛋白2的影響.pdf

1、背景 水通道蛋白是介導(dǎo)生物體內(nèi)水分轉(zhuǎn)運的非常重要的一種跨膜蛋白。迄今為止已發(fā)現(xiàn)13種水通道蛋白，廣泛地分布在哺乳動物的各種組織器官，有選擇而高效地完成水的轉(zhuǎn)運。大量的研究顯示有多種水通道蛋白豐富的表達于睪丸、精子、卵泡、子宮、胎盤胎膜等組織。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有多種水通道蛋白表達于雙側(cè)卵巢切除并以卵巢甾體激素作替代治療的小鼠子宮和圍種植窗期的小鼠子宮(孕1-8天)，其中只有水通道蛋白2(AQP2)在小鼠子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮有顯著表達，并且明顯

2、受雌激素的調(diào)控。然而，AQP2在子宮內(nèi)膜種植窗期的表達、作用以及與著床的關(guān)系到目前為止尚不清楚。 隨著現(xiàn)代輔助生育技術(shù)(Assistedreproductivetechnology，ART)的廣泛開展，使用控制性超促排卵(controlledovarianhyperstimulation，COH)已可以成功獲得多個成熟卵子，用于體外受精和胚胎移植，但其妊娠率卻一直徘徊在較低水平。其中一個重要因素即子宮內(nèi)膜容受性(uteriner

3、eceptivity)，是影響ART成敗的主要因素之一。在每個有排卵的月經(jīng)周期中，子宮內(nèi)膜僅在極短的時間內(nèi)才允許胚泡植入，稱為種植窗期(implantationwindow)，通常在月經(jīng)周期的20-24d，即LH高峰后的第7-11d。此時子宮內(nèi)膜表現(xiàn)出最大的胚泡種植容受性。大部分學(xué)者認為控制性超促排卵(COH)對子宮內(nèi)膜容受性有負面影響，可能通過一些被視為子宮內(nèi)膜容受性的標志物起作用，如：白血病抑制因子(leukemiainhibito

4、ryfactor，LIF)、整合素家族(integrins)和胞飲突(pinopode)等。最近有研究發(fā)現(xiàn)，水通道可能通過調(diào)控種植窗期子宮腔的閉鎖和胚泡黏附于子宮內(nèi)膜的過程而影響著床，因而可能是一種未被發(fā)現(xiàn)的子宮內(nèi)膜容受性的標志物。到目前為止，尚沒有實驗研究控制性超促排卵(COH)損害子宮內(nèi)膜的容受性與COH影響子宮內(nèi)膜上水通道蛋白的相關(guān)性。 研究目的 本實驗以小鼠為研究對象，設(shè)計超促排卵組和對照組模型，通過比較小鼠種植窗期子

5、宮內(nèi)膜水通道蛋白2(AQP2)mRNA在兩組中量表達的差異，來探討控制性超促排卵(COH)對小鼠子宮內(nèi)膜水通道蛋白2(AQP2)在種植窗期表達的影響，從而為超排卵方案影響胚胎成功著床是否與COH影響種植窗期子宮內(nèi)膜上水通道蛋白的表達相關(guān)性提供理論依據(jù)。 研究對象與方法 普通級雌性健康ICR小鼠20只，鼠齡6-7周，體重20～25g。按隨機表順序?qū)?0只ICR小鼠分為對照組和超促排卵組(COH組)。對照組：每日上午9：00時行陰

6、道分泌物和陰道涂片(HE染色)檢查，確定動情周期。COH組：腹腔注射孕馬血清促性腺激素(PMSG)10IU，48h后注射絨毛膜促性腺激素(HCG)10IU。對照組排卵后(陰道涂片出現(xiàn)排卵征象)48h，COH組注射HCG48h后，脫頸椎處死小鼠，迅速剖腹取出子宮。用免疫組織化學(xué)方法確定水通道蛋白2在小鼠子宮內(nèi)膜種植窗期的組織學(xué)定位，并通過RT-PCR方法和Real-timePCR檢測小鼠子宮內(nèi)膜水通道蛋白2的mRNA的表達，并進行相對定量

7、分析。 結(jié)果 1.免疫組織化學(xué)結(jié)果：在小鼠子宮內(nèi)膜種植窗期，水通道蛋白2(AQP2)主要存在于小鼠子宮內(nèi)膜腔上皮和腺上皮胞膜和胞漿。 2.實時熒光PCR結(jié)果：檢測時以β-肌動蛋白(β-actin)作為內(nèi)參照，對照組和超促排卵組(COH組)△CT值分別是2.665±0.755和1.055±0.443，兩組比較有顯著差異(P＜0.05)。表明超促排卵組子宮內(nèi)膜AQP2mRNA的表達量明顯高于對照組。 結(jié)論 1、成