低劑量米非司酮對人植入窗期子宮內膜水通道蛋白1的影響.pdf

1、米非司酮（mifepristone，RU486）是人類合成的一種19-去甲基類固醇，主要在受體水平上發(fā)揮作用。米非司酮是第一個用于臨床的孕激素受體拮抗劑，目前已廣泛應用于抗早孕。20世紀90年代，國內外均有報道米非司酮廣泛用于臨床緊急避孕，且用藥劑量在逐步減少。近年來，研究發(fā)現(xiàn)每日給予低劑量米非司酮，能阻止內膜發(fā)育而起避孕作用，即所謂的“內膜避孕”，對月經周期影響小，無明顯副作用。體外子宮內膜培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，米非司酮可以影響子宮內膜的容受

2、性，從而降低妊娠率。然而，低劑量米非司酮抗著床避孕作用機制仍不完全清楚。
　　正常的妊娠過程中，子宮內膜的容受性對妊娠的建立具有至關重要的作用。子宮內膜組織僅在極短暫的時間內對植入的胚胎表現(xiàn)為容受性，而在這個時間以外則排斥胚胎的植入，這個關鍵而短暫的時期被稱之為“植入窗”期，即月經廚期第20-24天，并且以某些子宮內膜生長因子、細胞因子、黏附分子的上調為特征。其中，血管生成是胚胎著床的關鍵步驟。正常月經周期中子宮動脈及螺旋動脈受卵

3、巢激素調節(jié)，血流呈周期性變化，子宮內膜間質水腫亦產生周期性變化。在胚胎即將著床時，子宮內膜血管增生、迂曲，間質明顯水腫疏松，但其變化機制尚不能完全明確。成功的植入有賴于子宮內膜和胚胎的同步發(fā)育，甚至一個微小的紊亂或失調都會阻止植入的發(fā)生。因此，植入窗期子宮內膜間質血管生成及水腫變化將直接影響子宮內膜的容受性。水通道蛋白1(aquaporin-1，AQP1)是唯一表達在內皮細胞上的水通道蛋白，負責內皮細胞跨膜和跨細胞高效水轉運，其不僅存在

4、于分泌及吸收上皮細胞中而且在子宮內膜間質的毛細血管及小血管的內皮細胞有高表達，對血管生成及血管內皮細胞的滲透性具有調節(jié)作用。
　　目的:
　　本文利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)，免疫組化及RT-PCR法研究低劑量米非司酮對人植入窗期子宮內膜AQP1表達的影響;利用倒置顯微鏡、MTT法檢測低劑量米非司酮對子宮內膜微血管密度（microvessel density, MVD）及人臍靜脈內皮細胞(humanumbilical vein endo

5、thelial cells，HUVECs)增殖的影響以探討低劑量米非司酮抗著床避孕作用的相關機制。
　　方法:
　　收集因輸卵管切除或丈夫不育，行IVF-ET婦女的子宮內膜。入選婦女月經史、生殖系統(tǒng)解剖、內分泌等指標均正常，近3個月內無激素類藥物使用史，于月經周期第20至24天取內膜。每例內膜分成三等份，給予不同處理（分別為對照組，65nmol/L組，200nmol/L組），組織培養(yǎng)12h。HUVECs分別給予0umol/L

6、，65nmol/L，200nmol/L，1000umol/L米非司酮處理6，12，24，48h。采用免疫組化EnVision二步法染色法及RT-PCR法檢測低劑量米非司酮對植入窗期子宮內膜AQP1蛋白及mRNA表達的影響;利用倒置顯微鏡檢測低劑量米非司酮對子宮內膜MVD的影響;采用MTT法檢測米非司酮對HUVECs增殖活性影響。
　　結果:
　　1.子宮內膜組織塊體外培養(yǎng)前后形態(tài)學觀察
　　培養(yǎng)前后子宮內膜均處于植入窗

7、期，腺體結構完整、血管較豐富，間質疏松水腫，各組間形態(tài)學無顯著性差異。
　　2.植入窗期子宮內膜AQP1蛋白表達的變化
　　AQP1陽性細胞著色為棕黃色，陽性細胞主要分布在血管內皮細胞表面。三組內膜AQP1蛋白表達分別為:對照組1.6±0.3，65nmol/L組2.1±0.1，200nmol/L組2.6±0.4。兩實驗組分別與對照組相比，顯著增高(P＜0.05）;兩實驗組之間有顯著差異(P＜0.05）。
　　3.植入窗

8、期子宮內膜AQP1 mRNA表達的變化
　　三組子宮內膜AQP1mRNA表達分別為:對照組1.08±0.18，65nmol/L組1.4±0.2，200nmol/L組1.6±0.2。三組有顯著差異(P＜0.05);兩實驗組分別與對照組相比，顯著增高(P＜0.05);兩實驗組之間有顯著差異(P＜0.05)。
　　4.植入窗期子宮內膜MVD的變化
　　低劑量米非司酮作用12h后，三組子宮內膜內膜MVD分別為:對照組350±9

9、，65nmol/L組353±5，200nmol/L組362±12。三組間MVD差異無顯著性(P＞0.05)
　　5.米非司酮對HUVECs增殖活性的影響。
　　四組（0nmol/L組，65nmol/L組，200nmol/L組，1000nmol/L組）米非司酮在不用培養(yǎng)時間(6，12，24,48h)對HUVECs增殖活性的影響。培養(yǎng)12h后，200nmol/L組及1000nmol/L組分別與對照組相比，顯著增高(P＜0.05)

10、，實驗組1000nmol/L組與65nmol/L組之間有顯著差異(P＜0.05)，其余各組間差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　6.AQP1siRNA處理后米非司酮對HUVECs增殖的影響。
　　我們選用200nmol/L，1000nmol/L組培養(yǎng)12h作為標準，檢測AQP1siRNA處理后低劑量米非司酮對HUVECs增殖的影響。結果顯示，AQP1siRNA處理后能明顯減弱米非司酮對HUVECs增殖活性的影響(P＜0.