影響乳腺癌標(biāo)本中ER和PR免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果的因素的初步探討.pdf

1、研究背景及目的 激素受體水平檢測在決定乳腺癌患者的治療方案上起著重要的作用，已成為乳腺癌治療的常規(guī)預(yù)測性和預(yù)后標(biāo)記。乳腺癌激素受體檢測的方法包括化學(xué)法，酶免疫測定法，直接熒光組化法和免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry,IHC）法。IHC法具有操作簡便，可以用于各種組織標(biāo)本如細(xì)針穿刺，細(xì)胞學(xué)以及腫瘤切除組織中，對標(biāo)本的量要求小等優(yōu)點(diǎn)。更重要的是它可以在石蠟組織中檢測，能夠定位組織中陽性細(xì)胞。正是由于這些優(yōu)點(diǎn)，國

2、內(nèi)外各實(shí)驗(yàn)室都已廣泛使用這一方法。隨著IHC方法的廣泛使用，很多問題也顯現(xiàn)出來。其中突出的問題是實(shí)驗(yàn)室之間的檢測結(jié)果可能有差異，染色的標(biāo)準(zhǔn)化水平低，部分實(shí)驗(yàn)室對低表達(dá)的腫瘤組織的檢測存在較多的假陰性結(jié)果。為了解決這些問題，需要對影響IHC染色結(jié)果的因素進(jìn)行不斷的深入研究，以提高檢測的可靠性，實(shí)現(xiàn)檢測的標(biāo)準(zhǔn)化，提高對診治的指導(dǎo)性。 本研究目的包括：1．總結(jié)ER和PR采用目前的IHC檢測方法時在乳腺癌患者中檢測結(jié)果的頻率分布；2．比

3、較經(jīng)冷凍切片處理的（以下稱凍后石蠟標(biāo)本）和未冷凍過的（以下稱凍余石蠟標(biāo)本）乳腺癌組織間激素受體IHC檢測結(jié)果的差異；3．應(yīng)用組織芯片的方法研究不同抗原修復(fù)液及修復(fù)時間對激素受體IHC檢測的影響；4．研究：IHC染色結(jié)果評價的重復(fù)性。 材料與方法 1．ER和PR在乳腺癌患者中IHC檢測結(jié)果的頻率分布：選取四川大學(xué)華西醫(yī)院2004年11月~2005年8月常規(guī)進(jìn)行了激素受體IHC檢測的經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的乳腺癌標(biāo)本267例

4、。提取IHC切片，重新評價染色的陽性細(xì)胞比例及陽性強(qiáng)度，進(jìn)行Q評分并進(jìn)行頻數(shù)分析。 2．凍后石蠟標(biāo)本和凍余石蠟標(biāo)本間激素受體IHC檢測結(jié)果的比較：從四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科2005年進(jìn)行術(shù)中冰凍診斷的乳腺癌中選取21例，每例選擇兩個蠟塊，分別為凍后和凍余的經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋的組織，共42個石蠟塊。在兩種抗原修復(fù)條件下，對凍后石蠟組織和凍余石蠟組織同時進(jìn)行ER和PR免疫組化染色。盲法結(jié)果評價，應(yīng)用配對t檢驗(yàn)、Wilcoxon符號

5、秩和檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 3．不同抗原修復(fù)液及修復(fù)時間對激素受體IHC檢測的影響：選取四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科20例確診為乳腺癌的標(biāo)本，共20個福爾馬林固定石蠟包埋蠟塊，制作組織芯片。研究5種抗原修復(fù)液對染色的影響，每種修復(fù)液設(shè)5個修復(fù)時間段（10~30min）。盲法結(jié)果評價，應(yīng)用重復(fù)資料的方差分析對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。并評價組織芯片染色結(jié)果與原始華西醫(yī)院病理科IHC染色結(jié)果的一致性。 4．IHC

6、染色結(jié)果評價的重復(fù)性：隨機(jī)選取20例乳腺癌ER IHC切片。由兩位病理醫(yī)師分別進(jìn)行結(jié)果評價，分別評估采用陽性細(xì)胞比例≥10％和≥1％為陽性界值，Q值等結(jié)果評價方法的重復(fù)性。 結(jié)果 1．ER和PR在乳腺癌患者中的IHC檢測結(jié)果的頻率分布 （1）ER的染色：39．3％的腫瘤完全沒有細(xì)胞核的染色。42．3％的腫瘤中，有50％或更多的腫瘤細(xì)胞顯示ER的細(xì)胞核陽性著色。以陽性細(xì)胞比例≥10％，≥1％和Q值≥3為陽性界值，E

7、R陽性頻率分別為54．7％，60．7％，60．7％。 （2）PR的染色：25．1％的腫瘤完全沒有細(xì)胞核的染色。53．9％的腫瘤中，有50％或更多的腫瘤細(xì)胞顯示PR的細(xì)胞核陽性著色。以陽性細(xì)胞比例≥10％，≥1％和Q值≥3為陽性界值，PR陽性頻率分別為68．2％，74．9％，74．9％。 2．凍后石蠟標(biāo)本和凍余石蠟標(biāo)本間激素受體IHC檢測結(jié)果的比較 凍后石蠟標(biāo)本與凍余石蠟標(biāo)本在兩種抗原修復(fù)方法下ER染色平均陽性細(xì)胞

8、比例分別為72．9％與70．1％，58．4％與63．0％。兩種類型標(biāo)本ER染色陽性細(xì)胞比例沒有顯著性差異（P>0．5）并具有顯著正相關(guān)性（P<0．05）。凍后石蠟標(biāo)本與凍余石蠟標(biāo)本在兩種抗原修復(fù)方法下ER染色平均Q值分別為6．62與6．33，5．52與5．43。兩種類型標(biāo)本ER染色Q值沒有顯著性差異（P>0．5）并具有顯著正相關(guān)性（P<0．01）。 凍后石蠟標(biāo)本與凍余石蠟標(biāo)本在兩種抗原修復(fù)方法下。PR染色平均陽性細(xì)胞比例分別為5

9、6．0％與56．4％，49．7％與50．1％。兩種類型標(biāo)本PR染色陽性細(xì)胞比例沒有顯著性差異（P>0．5）并具有顯著正相關(guān)性（P<0．001）。凍后石蠟標(biāo)本與凍余石蠟標(biāo)本在兩種抗原修復(fù)方法下PR染色平均Q值分別為5．90與5．86，5．76與5．76。兩種類型標(biāo)本PR染色Q值沒有顯著性差異（P>0．5）并具有顯著正相關(guān)性（P<0．001）。 3．不同抗原修復(fù)液及修復(fù)時間對激素受體IHC檢測的影響 激素受體IHC染色結(jié)果隨

10、抗原修復(fù)液以及修復(fù)時間的不同而發(fā)生變化?？梢垣@得最好染色結(jié)果的兩種抗原修復(fù)液為PH3．0檸檬酸鹽緩沖液和PH9．0Tris-EDTA。ER在這兩種抗原修復(fù)液下修復(fù)30min時平均陽性細(xì)胞比分別為38．0％和36．0％，統(tǒng)計(jì)分析具有顯著性差異（P<0．05）；PR在這兩種抗原修復(fù)液下修復(fù)30min時平均陽性細(xì)胞比例分別為35．0％和37．4％，統(tǒng)計(jì)分析不具有顯著性差異（P>0.05）。對低表達(dá)的腫瘤組織，ER使用PH3.0檸檬酸鹽緩沖液可

11、以獲得最好的染色結(jié)果。在相同的抗原修復(fù)條件下，組織芯片ER和PR染色結(jié)果與華西醫(yī)院病理科原始結(jié)果之間僅各有一例差異較大。 4.IHC染色結(jié)果評價的重復(fù)性 分別以陽性細(xì)胞比例≥10％和≥1％為陽性界值時，兩位病理醫(yī)師之間的評價結(jié)果一致性kappa值為0.643和1。當(dāng)使用Q值評價結(jié)果時，兩位病理醫(yī)師間評價結(jié)果一致性kappa值為0.599。 結(jié)論 1．IHC檢測ER（colon SP1）和PR（colon