應用Fluoro-Jade C方法研究神經(jīng)激肽NK3對黑質多巴胺神經(jīng)元興奮性毒性損傷的干預作用.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一種常見的中樞神經(jīng)變性疾病，患者出現(xiàn)靜止性震顫、運動遲緩、僵硬、步態(tài)異常和姿勢不穩(wěn)等嚴重的運動癥狀。PD的典型病理變化為大量黑質多巴胺神經(jīng)元變性死亡，現(xiàn)行的PD治療方法不能阻止黑質神經(jīng)元進行性死亡和PD病發(fā)生。以往研究表明在引起黑質多巴胺神經(jīng)元死亡和PD發(fā)生的多種因素中，谷氨酸興奮性毒性可能是重要原因之一。因此，探索阻止谷氨酸興奮性毒性損傷和保護黑質多巴胺神經(jīng)元的新手段，對于完善

2、PD治療十分必要。 神經(jīng)激肽(Neurokinins)是一個結構相似的速激肽家族，主要包括P物質(Neurokinin-1，NK1)、神經(jīng)激肽A(NK2)、神經(jīng)激肽B(NK3)，其生物學效應由相應的NK1、NK2和NK3受體(G蛋白偶聯(lián)受體)來介導。研究表明神經(jīng)激肽一神經(jīng)激肽受體在基底核分布十分豐富，它們與基底核神經(jīng)元之間存在顯著的相互作用，提示神經(jīng)激肽在基底核生理和病理發(fā)生的過程中可能具有重要作用。我們研究組以往的實驗已初步證

3、明神經(jīng)激肽分子能夠干預黑質神經(jīng)元興奮性毒性損傷，特別是發(fā)現(xiàn)神經(jīng)激肽NIC3受體激動劑能產(chǎn)生興奮性毒性的協(xié)同效應。因此，進一步確認神經(jīng)激肽NK3受體拮抗劑能否調節(jié)黑質多巴胺神經(jīng)元興奮性毒性損傷，具有重要價值。 本課題采用Fluoro-Jade C(FJC)染色、MPTP(1-methy-4-phenyl-1，2,3,6-tetrahydropyrindine)和KA (Kainic acid，紅藻氨酸)損傷動物模型、神經(jīng)激肽NK3

4、受體特異性拮抗劑干預方法、免疫組織化學染色、動物行為學分析等方法，研究FJC方法在MPTP和KA動物模型中的應用，以及神經(jīng)激肽NK3受體拮抗劑對黑質多巴胺神經(jīng)元興奮性毒性損傷的調節(jié)作用。 主要結果： 1．Fluoro-Jade C(FJC)是新出現(xiàn)的熒光染料，與Fluoro-Jade與Fluoro-JadeB的性質相似。我們將FJC染色應用于MPTP和KA損傷小鼠模型，證明FJC染色可以成功顯示黑質神經(jīng)元的變性死亡，是一

5、種簡單、敏感、可靠的方法。 FJC染色可清晰地顯示黑質變性神經(jīng)元的細胞胞體和突起。在中腦組織切片上，MPTP模型與KA模型黑質致密部內有許多FJC染色陽性的變性神經(jīng)元，而對照組動物黑質內未見FJC染色陽性的變性神經(jīng)元分布。 2．采用FJC染色顯示變性神經(jīng)元、TH免疫染色顯示存活的多巴胺神經(jīng)元等方法，分析比較不同處理組的黑質神經(jīng)元興奮性毒性損傷情況。結果表明：與單純KA組相比，NK3受體拮抗劑SB218795與KA共同處

6、理組動物黑質內FJC陽性變性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，其動物旋轉癥狀減輕，而TH陽性多巴胺神經(jīng)元數(shù)目明顯增加。而單純NK3受體拮抗劑SB218795處理，未見明顯毒性效應。 主要結論： 1．FJC方法能夠很好地顯示MPTP和KA動物模型黑質內神經(jīng)元的變性死亡，具備很高的對比度和分辨率，是一種特異性標記黑質變性神經(jīng)元樹突、軸突和胞體的優(yōu)良染色方法。 2．神經(jīng)激肽NK3受體拮抗劑能夠有效地減輕或抑制KA誘導的黑質多巴胺神經(jīng)