SKP2 siRNA對(duì)HL-60-A細(xì)胞周期及耐藥性的影響.pdf

1、背景與目的 急性白血病是血液腫瘤中最常見(jiàn)的疾病之一。隨著生命科學(xué)研究的不斷發(fā)展，治療白血病的方法不斷進(jìn)展。藥物的化療，分子靶向治療，造血干細(xì)胞移植等聯(lián)合治療使治療效果不斷提高。目前造血干細(xì)胞移植被認(rèn)為是治愈急性白血病唯一有效的方法，但是存在HLA相合配型難及費(fèi)用昂貴等問(wèn)題，藥物的化療仍是急性白血病治療的主要手段。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的化療方案治療后約有20％的初發(fā)患者不能獲得完全緩解，有60％左右的患者在完全緩解后復(fù)發(fā)，白血病細(xì)胞的原發(fā)及繼發(fā)

2、耐藥是白血病化療失敗的主要原因之一。因此提高白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性是治愈急性白血病的關(guān)鍵。 正常細(xì)胞在內(nèi)外因子的調(diào)節(jié)下有序的循著細(xì)胞周期不斷分裂增生及凋亡，保持動(dòng)態(tài)平衡。腫瘤細(xì)胞的增殖平衡失調(diào)，細(xì)胞出現(xiàn)無(wú)限制的增殖和凋亡減慢。細(xì)胞失控性增生對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要的意義。S期激酶相關(guān)蛋白2(S-phase kinase-associated：protein 2，SKP2)是一個(gè)與細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)的基因，屬癌基因，參與調(diào)控抑

3、癌基因P27<'kipI>的表達(dá)。P27<'kipI>為Cip/Kip家族(CDK-interacting protein/kinase inhibition protein)中的一員，是細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控因子，能阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期。SKP2、P27<'kipI>通過(guò)影響白血病細(xì)胞的增殖、分化、凋亡參與白血病疾病的進(jìn)程和預(yù)后。 SKP2、P27<'kipI>與白血病耐藥的研究尚存在爭(zhēng)議。通過(guò)檢測(cè)臨床白血病患者骨髓細(xì)胞SKP2、P

4、27<'kipI>的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，SKP2、P27<'kipI>的表達(dá)與患者的預(yù)后、對(duì)化療藥物的敏感性、完全緩解率有關(guān)，SKP2高表達(dá)或P27<'kipI>低表達(dá)的患者預(yù)后不良，P27<'kipI>的表達(dá)水平高，患者化療的緩解率高。但細(xì)胞周期的停滯有可能使白血病細(xì)胞對(duì)細(xì)胞周期依賴性的化療藥物更加不敏感。目前為止，有關(guān)降低癌基因SKP2的表達(dá)影響白血病耐藥的機(jī)制尚不明確。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)敏感細(xì)胞株HL-60和耐藥細(xì)胞株HL-60/A的細(xì)胞周

5、期調(diào)控因子SKP2、P27kipl進(jìn)行檢測(cè)，探討SKP2、P27kipl在白血病細(xì)胞中的表達(dá)與耐藥、預(yù)后的關(guān)系；設(shè)計(jì)合成具有良好沉默效應(yīng)的SKP2siRNA，研究SKP2基因水平下調(diào)后，白血病耐藥細(xì)胞株HL-60/A中P27<'kipI>、MRP的表達(dá)情況，HL-60/A耐藥性的變化，初步探討下調(diào)SKP2基因表達(dá)對(duì)白血病耐藥的影響。 結(jié)論 1 HL-60/A細(xì)胞對(duì)多種化療藥物耐藥，其多藥耐藥的發(fā)生與MRP蛋白的過(guò)度表達(dá)有

6、關(guān)。 2 耐藥細(xì)胞株HL-60/A中SKP2的表達(dá)高于敏感細(xì)胞株HL-60，而P27<'kipl>的表達(dá)低于后者。SKP2在耐藥細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，可能成為逆轉(zhuǎn)白血病耐藥的一個(gè)潛在的分子靶點(diǎn)。 3 HL60/A細(xì)胞處于細(xì)胞周期中G0/G1期的細(xì)胞比例減少，與細(xì)胞P27<'kipl>表達(dá)水平減低有關(guān)。 4 以SKP2基因mRNA為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)合成的siRNA能下調(diào)SKP2 mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，這種作用具有高度的特異

7、性。 5 體外合成的siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其作用是瞬時(shí)性的，持續(xù)時(shí)間24～48h左右。 6 RNA干擾SKP2基因可上調(diào)P27kipl蛋白的表達(dá)，但對(duì)P27<'kipl>mRNA的表達(dá)無(wú)影響，SKP2對(duì)P27<'kipl>的調(diào)節(jié)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平。 7 RNA干擾SKP2基因可阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，細(xì)胞周期的停滯可能與P27<'kipl>表達(dá)增加有關(guān)。 8 RNA干擾SKP2基因后細(xì)胞MRP蛋白和mRN