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文檔簡介
1、目的:念珠菌為醫(yī)院感染的主要致病真菌,由于抗真菌藥的廣泛應(yīng)用,念珠菌感染所致的深部真菌病逐年增加,氟康唑作為重要抗真菌藥物之一,在臨床上取得了良好的治療效果,但耐藥菌株的出現(xiàn)也引起臨床的重視。
本論文收集臨床耐藥菌株,調(diào)查深部念珠菌感染的菌種分布和對氟康唑的耐藥性,并對藥物靶酶基因(ERG11)和外排泵基因(MDR1)進(jìn)行初步研究,了解念珠菌對三唑類藥物耐藥的分子機(jī)制。為臨床合理使用抗真菌藥物提供實驗室依據(jù)。
2、 方法:收集2007-2008年臨床分離的白色念珠菌、熱帶念珠菌菌株各100株。采用M44-P酵母菌紙片擴(kuò)散法和E-Test法進(jìn)行氟康唑藥敏實驗,保存對氟康唑耐藥菌株。
采用PCR技術(shù)擴(kuò)增白色念珠菌氟康唑靶酶基因的ERG11,測序后比較序列差異,研究基因點突變與耐藥表型的相關(guān)性;應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù),檢測熱帶念珠外排泵基因MDR1表達(dá)量的差異,研究耐藥基因表達(dá)與氟康唑耐藥的關(guān)系。
結(jié)果:
3、1兩種念珠菌對氟康唑的耐藥性分別為:白色念珠菌對氟康唑的耐藥率為5%(5/100),熱帶念珠菌對氟康唑的耐藥率為8%(8/100)。
2白色念珠菌耐藥菌中產(chǎn)生ERG11基因的突變,其中10個為有義點突變,15個為無義點突變。10個有義點突變的氨基酸分別為F72L、F105L、D116E、K128T、Y132H、K147R、Y153E、P386L、S405F和D466N,其中P386L變異為本次實驗中首次發(fā)現(xiàn)的點突變,有待進(jìn)
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