GBSSI與glgC融合基因馬鈴薯轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建.pdf

1、增加塊莖淀粉含量，改良淀粉品質(zhì)是提高馬鈴薯工業(yè)淀粉利用效率、拓寬其應(yīng)用領(lǐng)域的前提。隨著對(duì)淀粉生物合成代謝途徑分子生物學(xué)機(jī)理研究的深入，運(yùn)用基因工程途徑調(diào)控淀粉生物合成中相關(guān)酶的活性增加淀粉含量，改良淀粉品質(zhì)成為可能。 研究業(yè)已表明，在植物中，與淀粉粒結(jié)合的淀粉合成酶(GBSSI)是唯一決定貯藏器官中直鏈淀粉合成的酶，催化淀粉生物合成底物(ADP-葡萄糖)形成的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是淀粉生物合成的限速酶，其活

2、性受晝夜周期變化的調(diào)控；大腸桿菌編碼AGPase的glgC基因馬鈴薯體內(nèi)表達(dá)可提高其塊莖淀粉含量達(dá)60﹪。為了提高塊莖內(nèi)淀粉含量和獲得糯性淀粉塊莖，本研究擬用大腸桿菌glgC編碼的AGPase替代馬鈴薯內(nèi)源AGPase，提高和穩(wěn)定AGPase活性，以期增加塊莖淀粉含量；同時(shí)用反義cDNA結(jié)構(gòu)抑制GBSSI活性，達(dá)到抑制直鏈淀粉合成，獲得糯性淀粉塊莖的目的。為此，本論文通過(guò)PCR和RT-PCR等方法，獲得了大腸桿菌glgC基因，馬鈴薯GB

3、SSIcDNA和塊莖特異性表達(dá)的GBSSI啟動(dòng)子，并分別構(gòu)建了由GBSSI、CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的glgC和反義GBSSIcDNA五個(gè)植物轉(zhuǎn)化載體，它們分別包含以下融合基因：①GBSSI啟動(dòng)子與GUS融合基因，旨在為塊莖生物反應(yīng)器目的載體的構(gòu)建提供基本框架。②CaMV35S和GBSSI啟動(dòng)子分別驅(qū)動(dòng)glgC的融合基因，旨在比較兩個(gè)啟動(dòng)子在驅(qū)動(dòng)glgC表達(dá)、增加塊莖淀粉合成的區(qū)別；③GBSSI啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GBSSIcDNA反義結(jié)構(gòu)、GB