熱休克蛋白70過表達對淋巴細胞輻射損傷的保護效應(yīng).pdf

1、目的：本研究課題選取HSPs家族中最為重要的HSP70為代表，研究了42℃，90min熱休克預(yù)處理后淋巴細胞中HSP70的表達規(guī)律；觀察了42℃，90min熱休克預(yù)處理對淋巴細胞存活，凋亡和hprt基因突變的影響；重點研究了誘導表達的HSP70對X射線照射引起的淋巴細胞凋亡和hprt基因突變的影響，旨在探討HSP70保護細胞，減輕輻射損傷的機理，為研究抗輻射損傷藥物和尋找提高腫瘤放射治療效果的藥物提供基礎(chǔ)性研究資料。 方法：(1

2、)采用Ficoll法分離大鼠外周血中的淋巴細胞，梳刮法制備大鼠脾臟淋巴細胞懸液；采用臺盼藍染色法，AnnexinV/PI雙標法的流式細胞術(shù)和多核細胞法分別檢測42℃，90min熱休克預(yù)處理對大鼠外周血和脾臟淋巴細胞的存活率，凋亡和hprt基因的影響，確定誘導HSP70表達的熱休克條件；同時采用流式細胞術(shù)檢測42℃，90min熱休克預(yù)處理后淋巴細胞中HSP70的表達規(guī)律，為研究HSP70的輻射防護作用做準備。 (2)對大鼠外周血和

3、脾臟淋巴細胞進行42℃，90min熱休克預(yù)處理，于正常培養(yǎng)條件下分別恢復3h，6h和10h后，分別給予0Gy，0.5Gy，1.0Gy，1.5Gy，2.0Gy，2.5Gy，3.0Gy的X線照射，應(yīng)用AnnexinV/PI雙熒光標記的流式細胞術(shù)檢測淋巴細胞凋亡率的變化，研究HSP70是否可以減少輻射引起的細胞凋亡。 (3)對大鼠外周血和脾臟淋巴細胞進行42℃，90min熱休克預(yù)處理，于正常培養(yǎng)條件下分別恢復3h，6h和10h后，分別

4、給予0Gy，0.5Gy，1.0Gy，1.5Gy，2.0Gy，2.5Gy，3.0Gy的X線照射，采用多核細胞法檢測淋巴細胞hprt基因突變情況，研究HSP70是否可以減輕輻射引起的細胞hprt基因突變率。 結(jié)果：(1)42℃，90min的熱休克預(yù)處理對淋巴細胞的的存活率，凋亡率，和hprt基因突變率沒有影響，對淋巴細胞是一種無害刺激。 (2)淋巴細胞在42℃，90min的熱休克預(yù)處理后表達立即增高，2～4h表達最為明顯(P

5、<0.01)，隨后至少可持續(xù)表達24h。 (3)X射線照射劑量在0.5～3.0Gy時，外周血和脾臟淋巴細胞熱休克預(yù)處理后恢復培養(yǎng)6h或10h，熱休克+照射組與照射組比較淋巴細胞凋亡率差異明顯(P<0.01)，恢復培養(yǎng)3h時淋巴細胞凋亡率無差異(P>0.01)；熱休克預(yù)處理后恢復培養(yǎng)3h，6h或10h的熱休克+照射組與照射組比較淋巴細胞的壞死率無差異(P>0.01)。 (4)X射線照射劑量在0～3.0Gy時，外周血和脾臟淋

6、巴細胞熱休克預(yù)處理后恢復3h，6h或10h，X射線引起的細胞hprt基因突變在熱休克+照射組與照射組之間比較無明顯差異(P<0.01)。HSP70對外周血和脾臟淋巴細胞的hprt基因的保護效率，在0.5Gy時為70％左右，在3.0Gy時為30％左右；HSP70對hprt基因的保護效率小劑量照射時效果顯著。 結(jié)論：(1)42℃，90min的熱休克預(yù)處理對大鼠外周血和脾臟淋巴細胞的存活，凋亡和hprt基因突變無顯著影響，即42℃，9

7、0min的熱休克預(yù)處理是誘導淋巴細胞高表達HSP70的理想條件。 (2)大鼠外周血和脾臟淋巴細胞在42℃，90min條件下熱休克預(yù)處理后細胞中HSP70表達立即增高，2～4h表達最為明顯，隨后表達逐漸下降，24h時表達仍高于正常水平。 (3)照射劑量在0.5～3.0Gy時，大鼠外周血和脾臟淋巴細胞接受42℃，90min的熱休克預(yù)處理，恢復培養(yǎng)6h或10h時誘導的HSP70可以明顯減少輻射引起的細胞凋亡，對細胞起到保護效應(yīng)