斛芪浸膏對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞輻射損傷的保護(hù)作用.pdf

1、研究目的：
　　 通過(guò)實(shí)驗(yàn)探討中藥復(fù)方制劑斛芪浸膏是否具有維持60Co輻照后的離體小鼠胸腺細(xì)胞的細(xì)胞活力，以及抑制細(xì)胞凋亡和減輕電離輻射所致細(xì)胞氧化損傷的作用。
　　 研究方法：
　　 取4-8周健康雄性昆明小鼠，分離胸腺淋巴細(xì)胞作原代培養(yǎng)，孵育4小時(shí)后，分為對(duì)照組(CG)、輻照組(IG)、輻照加低劑量斛芪浸膏組(ILHEG)、輻照加中劑量斛芪浸膏組(IMHEG)及輻照加高劑量斛芪浸膏組(IHHEG)。對(duì)照組及輻

2、照組添加不含斛芪浸膏藥物的RPMI1640培養(yǎng)液，輻照加低劑量斛芪浸膏組、輻照加中劑量斛芪浸膏組、輻照加高劑量斛芪浸膏組分別添加等量相應(yīng)濃度的斛芪浸膏溶液，作用10小時(shí)。除對(duì)照組外，其余各組均采用60COγ射線5Gy單次輻照。
　　 (1)于輻照后12、24、36、48小時(shí)，分別用四唑鹽比色法檢測(cè)各組細(xì)胞吸光度A值。輻照后第10、24小時(shí)，分別用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。輻照后10小時(shí)，用PI和Annexin-V雙標(biāo)記，流式細(xì)胞儀

3、檢測(cè)各組細(xì)胞早期凋亡比例；輻照后24小時(shí)，提取各組細(xì)胞總DNA，用瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，觀察DNA損傷情況。
　　 (2)輻照后30分鐘內(nèi)分別用流式細(xì)胞儀及超氧化物檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)活性氧熒光強(qiáng)度及超氧化物含量。
　　 結(jié)果：
　　 (1)輻照后12-24小時(shí)，輻照組細(xì)胞活力呈下降趨勢(shì)，對(duì)照組細(xì)胞活力水平高于輻照組，輻照加低、中、高斛芪浸膏各組細(xì)胞活力均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，24小時(shí)以后，各組細(xì)胞活力均開(kāi)始

4、下降，但輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組細(xì)胞活力水平明顯高于對(duì)照組及輻照組，且呈現(xiàn)劑量依賴性，輻照后36小時(shí)，輻照加低、中、高劑量組與輻照組比較，細(xì)胞活力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。輻照后第10、24小時(shí)，顯微鏡下觀察，輻照加斛芪浸膏各組細(xì)胞變性、固縮變小等細(xì)胞壞死、凋亡等表現(xiàn)與輻照組比較相對(duì)較輕。輻照后10小時(shí)，輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組細(xì)胞早期凋亡比例均低于輻照組，其中高劑量組與輻照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05

5、)。輻照后24小時(shí)，輻照組及輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組細(xì)胞總DNA經(jīng)電泳后均出現(xiàn)了典型的DNA階梯狀斷裂條帶，但輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組DNA損傷相對(duì)較輕，輻照加高劑量斛芪浸膏組作用最明顯。
　　 (2)與輻照組比較，輻照加中、高劑量斛芪浸膏組細(xì)胞內(nèi)活性氧強(qiáng)度(P<0.01)及超氧化物水平(P<0.01)有不同程度下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。輻照加中劑量斛芪浸膏組與輻照加高劑量斛芪浸膏組作用比較無(wú)明顯差別(P>0.05