CVB-,3-心肌炎CTL亞類TCR Vβ基因取用格局分析.pdf

1、學(xué)枝代碼：10610學(xué)號(hào)$032552四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文題目￡堅(jiān)!壘皿熊!!!堊羞!鯉!Q墨固塾旦縫旦量蚯指導(dǎo)教師——j邑_益』L——一四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文CVB3心肌炎CTL亞類TCRV#基因取用格局分析研究生：王一斌導(dǎo)師：華益民摘要目的通過對(duì)柯薩奇病毒(CVB3)心肌炎細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)亞類(ACTL、VCTL、MCTL)TCRCDR3V口基因取用格局的分析，確定觸發(fā)免疫反應(yīng)性心肌損傷的特異性CTL細(xì)胞

2、克隆，揭示疾病的發(fā)病機(jī)制，為阻斷CTL與心肌細(xì)胞的結(jié)合最終達(dá)到防治病毒性心肌炎的目的提供先決條件。方法①選體重2530克，6—8周齡的雄性Balb／c鼠，每只腹腔內(nèi)注射6x104PFU的CVB3，制作CVB3心肌炎動(dòng)物模型，同體重、同周齡的雄性Balb／c鬣作為對(duì)照組；②無菌摘取取72小時(shí)內(nèi)新生Balb／e鼠心臟，培養(yǎng)單層心肌細(xì)胞；③單層心肌細(xì)胞分為三組，分別用CVB3處理、放線菌素D處理和不經(jīng)過任何處理；④無菌摘取CVB3心肌炎鼠腸系

3、膜淋巴結(jié)及腹股溝淋巴結(jié)，制成單細(xì)胞懸液，分別將細(xì)胞懸液加入上述三組單層心肌細(xì)胞，采用免疫吸附法獲取ACTL、VCTL、MCTL；⑤采用MTT法對(duì)ACTL、VCTL、MCTL和對(duì)照組T細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒鑒定，分剮計(jì)算OD值及細(xì)胞毒活性：④分剮設(shè)計(jì)CTL的V口引物作為上游引物，c口引物作為下游引物；⑦常規(guī)進(jìn)行RTPCR，PCR反應(yīng)產(chǎn)物瓊脂糖凝膠上電泳，確認(rèn)PCR反應(yīng)產(chǎn)物，并據(jù)姥劌斷TCRVgl基因的取用格局。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組ACTL、VCTL、MCT