AQ4N在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)的代謝研究.pdf

1、第一部分高效液相色譜方法測(cè)定人腦腫瘤微粒體中AQ4N及孵育代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4含量 目的：尋找簡(jiǎn)便、快捷、高靈敏度的檢測(cè)人腦腫瘤微粒體中AQ4N及孵育代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4濃度的方法。 方法：通過(guò)建立高效液相色譜方法(HPLC)測(cè)定人腦腫瘤微粒體內(nèi)的AQ4N及孵育代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4的含量。 結(jié)果：建立了高效液相色譜方法(HPLC)測(cè)定人腦腫瘤微粒體孵育體系中AQ4N及孵育代謝產(chǎn)

2、物AQ4M，AQ4的含量，并對(duì)該方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。其線性范圍為：AQ4N 2.245-71.850μg／ml；AQ4M0.366-11.700μg／ml；AQ4 0.740-23.700μg／ml，相關(guān)系數(shù)r為：AQ4N0.99602；AQ4M 0.99644；AQ4 0.99984，最小檢出濃度為AQ4N1.422μg/ml，AQ4M 0.281μg/ml，AQ4 0.712μg/ml。 結(jié)論：本方法用于檢測(cè)人腦腫瘤

3、微粒體孵育體系中AQ4N及代謝產(chǎn)物AQ4M，AQ4的含量，簡(jiǎn)單、快捷、具有高靈敏度。 第二部分 AQ4N在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)的代謝 目的：目前，對(duì)腫瘤微粒體內(nèi)的物質(zhì)代謝進(jìn)行的研究還很有限。AQ4N是一種在無(wú)氧或低氧狀態(tài)下(通常存在于實(shí)質(zhì)性腫瘤內(nèi))被CYP450代謝轉(zhuǎn)化產(chǎn)生毒性代謝產(chǎn)物的新型抗腫瘤前藥。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)AQ4N在低氧狀態(tài)的原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)的代謝對(duì)腫瘤微環(huán)境內(nèi)的藥物代謝及相關(guān)CYP4

4、50酶對(duì)代謝的作用進(jìn)行探討。 方法：白臨床上取得人腦腫瘤組織標(biāo)本后，以差速離心法制備腫瘤微粒體，以Lowry法進(jìn)行蛋白定量。在37℃的水浴中建立孵育體系，加入AQ4N和／或CYP3A的抑制劑三乙酰竹桃霉素及CYP1A1／1B1的抑制劑白藜蘆醇，通過(guò)HPLC方法檢測(cè)AQ4N在低氧狀態(tài)下15個(gè)腦腫瘤(7個(gè)原發(fā)性腦腫瘤及8個(gè)來(lái)源于肺癌的轉(zhuǎn)移性腦腫瘤)微粒體孵育體系內(nèi)的代謝產(chǎn)物及加入抑制劑后的代謝產(chǎn)物。 結(jié)果：在15個(gè)腦

5、腫瘤微粒體的孵育體系中都可檢測(cè)到AQ4N的代謝產(chǎn)物AQ4M及AQ4，尤其是表達(dá)CYP3A4的來(lái)源于肺癌的轉(zhuǎn)移性腦腫瘤(S20，S21)中，AQ4檢出量最高，并且三乙酰竹桃霉素能夠明顯抑制這些標(biāo)本內(nèi)的AQ4N的代謝，白藜蘆醇則影響輕微。另外13／15個(gè)腦腫瘤標(biāo)本(除了S20，S21)可以觀察到白藜蘆醇對(duì)微粒體內(nèi)AQ4N代謝的抑制，但三乙酰竹桃霉素則抑制作用微弱。 結(jié)論：AQ4N確實(shí)可以在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性腦腫瘤微粒體內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，并且與