MLA對(duì)小鼠腦神經(jīng)元作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討α7nAChR競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑（MLA）對(duì)昆明小鼠腦神經(jīng)元的損傷及六味地黃丸（LDP）的保護(hù)作用。 方法：實(shí)驗(yàn)一 MLA對(duì)昆明小鼠腦神經(jīng)元的損傷作用研究給予昆明小鼠腹腔注射MLA不同劑量(1.0、2.4、4.8 mg/kg)、不同天數(shù)(1d、3d、6d)后，測(cè)試各組小鼠Morris 水迷宮（MWM）學(xué)習(xí)記憶能力，并觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變以及α7nAChR免疫組織化學(xué)陽(yáng)性表達(dá)的變化。實(shí)驗(yàn)二 LDP對(duì)昆明小鼠腦神經(jīng)元的保護(hù)作用研

2、究（1） LDP預(yù)防組：①LDP組：實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃LDP不同療程（28d、10d）；②LDP+MLA組：實(shí)驗(yàn)小鼠先灌胃LDP不同療程（28d、10d）后，連續(xù)腹腔注射 MLA 4.8 mg/kg 6d；（2）LDP治療組（MLA+LDP組）：實(shí)驗(yàn)小鼠連續(xù)腹腔注射MLA 4.8 mg/kg 6d后，接著LDP灌胃10d。測(cè)試預(yù)防、治療各組小鼠Morris 水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力，并觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變以及α7nAChR免疫組織化學(xué)陽(yáng)性表達(dá)的變化

3、。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一（1）MLA對(duì)小鼠MWM學(xué)習(xí)記憶行為的影響：定位航行試驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射MLA1.0和2.4mg/kg各組小鼠的逃逸潛伏期與生理鹽水對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，而MLA4.8mg/kg連續(xù)3d和6d組小鼠的逃逸潛伏期較生理鹽水對(duì)照組的明顯延長(zhǎng)，有顯著性差異( (P<0.01)；空間探索試驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射MLA1.0和2.4mg/kg各組小鼠在目標(biāo)象限的時(shí)間分布與生理鹽水對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.

4、05)，MLA4.8mg/kg連續(xù)3d和6d組目標(biāo)象限的時(shí)間分布比生理鹽水對(duì)照組小鼠的明顯減少，有顯著性差異(P<0.01)。各組小鼠在各測(cè)試時(shí)段的游泳速度以及在可見(jiàn)平臺(tái)試驗(yàn)中的逃逸潛伏期和目標(biāo)象限的時(shí)間分布與生理鹽水對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；（2）細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察：腹腔注射MLA1.0和2.4mg/kg各組小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)未見(jiàn)異常，腹腔注射MLA4.8mg/kg連續(xù)3d組損傷輕微，突觸小泡適中，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)尚

5、可，核膜結(jié)構(gòu)基本清晰；而腹腔注射MLA4.8mg/kg連續(xù)6d組損傷比較嚴(yán)重，突觸減少，突觸前、后膜結(jié)構(gòu)不清晰，突觸小泡數(shù)量減少，部分神經(jīng)元細(xì)胞核有固縮狀態(tài)，核膜略微增厚和畸變，線粒體腫脹，有溶酶體出現(xiàn)。（3）免疫組織化學(xué)結(jié)果：腹腔注射MLA1.0 、2.4 mg/kg各組小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)有α7nAChR陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二（1）LDP對(duì)小鼠MWM學(xué)習(xí)記憶行為的影響：定位航行試驗(yàn)結(jié)果，①LDP組：僅灌胃LDP組小鼠逃逸潛伏期與生理鹽

6、水對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；②LDP預(yù)防（LDP+MLA）組和LDP治療（MLA+LDP）組小鼠的逃逸潛伏期與生理鹽水對(duì)照組比較明顯延長(zhǎng)，有顯著性差異(P<0.01)，與MLA損傷組比較有縮短趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P>0.05)。空間探索試驗(yàn)結(jié)果，①LDP組：僅灌胃LDP組小鼠目標(biāo)象限的時(shí)間分布與生理鹽水對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；②LDP預(yù)防（LDP+MLA）組和LDP治療（MLA+LDP）組小鼠目標(biāo)象限的時(shí)

7、間分布較生理鹽水對(duì)照組明顯下降，有顯著性差異(P<0.01)；與MLA損傷組比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；各組小鼠在各測(cè)試時(shí)段的游泳速度以及在可見(jiàn)平臺(tái)試驗(yàn)中的的逃逸潛伏期和目標(biāo)象限的時(shí)間分布均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。（2）細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察：①LDP組：僅灌胃LDP組小鼠腦海馬、皮質(zhì)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常；②LDP預(yù)防（LDP+MLA）組有損傷，但與MLA損傷組比較，損傷程度輕；③LDP治療（MLA+LDP）組損傷較重，與MLA損傷組

8、比較有輕微改善。（3）免疫組織化學(xué)結(jié)果，LDP組、LDP預(yù)防（LDP+MLA）組和LDP治療（MLA+LDP）組小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)均有α7nAChR陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)。 結(jié)論：（1）連續(xù)3d以上小鼠腹腔注射α7nAChR競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑MLA4.8mg/kg能夠造成小鼠腦海馬、皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元的損傷，進(jìn)而導(dǎo)致小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙，可作為較合理的近期記憶損傷動(dòng)物模型。（2）預(yù)防性灌胃LDP和治療性灌胃LDP均能夠抑制MLA對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠神經(jīng)元損傷