復方牛胎肝提取物對肝纖維化大鼠肝組織Toll樣受體-4、核因子-kBp65表達的影響.pdf

1、目的:多種原因可引起慢性的持續(xù)性的肝臟損傷。最常見的病因有慢性乙型病毒性肝炎、慢性丙型病毒性肝炎及酒精性肝病，此外藥物性肝炎、自身免疫性肝病等亦非罕見。而長期的反復的肝臟炎癥損傷及再生修復過程將導致肝纖維化(Hepatic fibrosis)及肝硬化(Hepatic cirrhosis)，甚至肝癌，從而嚴重影響患者生活質量、威脅患者生命。因此延緩、終止甚至逆轉肝纖維化對慢性肝病患者及臨床工作者而言有著重大意義。目前研究表明肝纖維化并非完

2、全不可逆，研究肝纖維化的發(fā)生發(fā)展機制，尋找肝纖維化新的治療靶點正為廣大科研及臨床工作者密切關注。本實驗通過通過初步觀察復方牛胎肝提取物治療前后，肝纖維化大鼠肝組織Toll樣受體-4(Toll like receptor-4，TLR4)、核因子-κBp65（Nuclear factor-kappaBp65，NF-κBp65）表達水平的變化及肝組織纖維化程度的變化，對復方牛胎肝提取物的抗纖維化機制進行初步探討。
　　方法:將60只清潔

3、級健康SD(Sprague Dawley)大鼠分為對照組、模型組各12只，治療組36只，再按復方牛胎肝提取物治療劑量不同分別分為大、中、小劑量治療組。模型組及治療組的造模方法為將四氯化碳(CCL4)與橄欖油配成40％油劑，按0.3ml/100g體重皮下注射，2次/周，模型處理持續(xù)12周，對照組同時注射等量生理鹽水。在4周末，將治療組大鼠按復方牛胎肝提取物治療劑量不同，分為大、中、小劑量治療組。復方牛胎肝提取物大、中、小劑量治療組按每公斤

4、體重相當臨床劑量的20、10、5倍灌胃，1次/d，連續(xù)治療8周，模型組及正常組以等滲鹽水代替。大鼠均于12周時經(jīng)10％水合氯醛0.3mL/kg麻醉后，門靜脈采血3-5ml，1500r/min離心5min，離心半徑10cm，取上清液，測血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、透明質酸(HA)的表達變化。另開腹取肝臟組織，部分肝臟組織以10％中性甲醛溶液固定，石蠟包埋后制備十來張病理切片。HE及Masson染色后顯微鏡

5、下觀察及評估肝組織病理變化。其余肝組織迅速置于液氮凍存，RT-PCR法檢測各組肝組織TLR-4及NF-KBp65mRNA的表達。WB檢測各組肝組織TLR-4及NF-KBp65mRNA蛋白表達水平。計量資料采用均數(shù)±標準差((x)±s)表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，以SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、四氯化碳溶液成功誘導出大鼠肝纖維化模型:造模4周時即可見模型組及

6、治療組大鼠血清中ALT、AST水平比對照組明顯升高，HA水平呈同樣趨勢。肝組織切片病理學觀察見正常肝小葉結構破壞，纖維結締組織增生明顯，自匯管區(qū)向外延伸分隔，部分視野可見假小葉。復方牛胎肝提取物治療后以上血清學指標水平逐漸下降，大劑量治療組降低最為顯著。且模型組及治療組各血清學指標與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2、RT-PCR結果顯示:正常組TLR4、NF-κBp65 mRNA表達水平較低，肝纖維化模型組表達水平

7、最高，復方牛胎肝提取物治療組表達較模型組表達減少，各組之間差異有明顯統(tǒng)計學意義(F值分別為521.48，693.61，1409.38，22.76;均P＜0.01)
　　3、蛋白定量結果顯示:通過Western蛋白印跡法檢測治療組及模型組TLR4、NF-κBp65蛋白表達量均明顯高于正常組，具有明顯差異（F值分別為15.76，12.29，均p≤0.01）。
　　結論:
　　TLR4及NF-kBp65mRNA及蛋白在正常肝